Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐产品描述

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。

嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐 产品性质

CAS号（CAS NO.）

58-58-2

分子式（Formula）

C22H29N7O5·2HCl

分子量（Molecular weight）

544.43

纯度（Purity, HPLC）

＞98%

外观（Appearance）

白色至米白色粉末

结构式（Structure）


运输和保存方法

冰袋运输。

4℃干燥保存，1年有效；为了维持最好的产品稳定性，建议-20℃干燥保存，2年有效。

使用方法

1. 建议使用浓度

哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；

大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

2. 溶解方法

用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的储存液。

3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。

1） Day 1：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐胞孵育过夜；

2） Day 2：a）准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；b）往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；

3） Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。

4） 根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；

5） 每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非转导细胞的药物最低浓度。

4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。

1） 细胞转染48h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。

2） 每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。

3） 筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。

4） 转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。



2）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放。
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐yb1513 OPCDS 少突胶质前体分化生长因子 Oligodendrocyte Precursor Cell Differentiation Supplement 5 ml
yb1514 SCGS 雪旺细胞生长因子 Schwann Cell Growth Supplement 5 ml
yb1515 AGS 星形细胞生长因子 Astrocyte Growth Supplement 5 ml
yb1516 AGS-a 星形细胞生长因子-动物 Astrocyte Growth Supplement-Animal 5 ml
yb1517 MGS 小胶质细胞生长因子 Microglia Growth Supplement 5 ml
yb1518 MGS 巨噬细胞生长因子 Macrophage Growth Supplement 50 ml
yb1519 KGS 角质细胞生长因子 Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1520 KGS-2 角质细胞生长因子（不含 BPE) BPE-free Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1521 KGS-acf 角质细胞生长因子（不含动物成分） Keratinocyte Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1522 MelGS 黑色素细胞生长因子 Melanocyte Growth Supplement 5 ml
yb1523 MelGS-2 黑色素细胞生长因子（不含TPA) TPA-free Melanocyte Growth Supplement 5 ml
yb1524 FGS 成纤维细胞生长因子 Fibroblast Growth Supplement 5 ml
yb1525 FGS-sf 成纤维细胞生长因子-sf Fibroblast Growth Supplement-sf 5 ml
yb1526 FGS-acf 成纤维细胞生长因子（不含动物成分） Fibroblast Growth Supplement-animal component free 5 ml
yb1527 FGS-2 成纤维细胞生长因子-2 Fibroblast Growth Supplement-2 5 ml
yb1528 TEpiCGS 扁桃体上皮细胞生长因子 Tonsil Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1529 OKGS 口腔角质细胞生长因子 Oral Keratinocyte Growth Supplement 5 ml
yb1530 CoEpiCGSS 结肠上皮细胞生长因子 Colonic Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1531 BEpiCGS 支气管上皮细胞生长因子 Bronchial Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1532 SAEpiCGS 小气道上皮细胞生长因子 Small Airway Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1533 SkMCGS 骨骼肌细胞生长因子 Skeletal Muscle Cell Growth Supplement 5 ml
yb1534 EpiCGS 上皮细胞生长因子 Epithelial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1535 EpiCGS-2 上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-2 5 ml
yb1536 EpiCGS-a 动物上皮细胞生长因子-2 Epithelial Cell Growth Supplement-animal 5 ml
yb1537 MCGS 肾系膜细胞生长因子 Mesangial Cell Growth Supplement 5 ml
yb1538 UCGS 尿道上皮细胞生长因子 Urothelial Cell Growth Supplement 5 ml