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Recombinant bovine Beta-1,4-galactosyltransferase 1
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上海笃玛生物科技有限公司
重组蛋白定义
其获得途径可以分为体外方法和体内方法。两种方法的前提都是应用基因重组技术,获得连接有可以翻译成目的蛋白的基因片段的重组载体,之后将其转入可以表达目的蛋白的宿主细胞从而表达特定的重组蛋白分子。当前主要应用的重组蛋白的表达载体包括原核细胞如大肠杆菌、真核细胞如酵母、昆虫细胞以及CHO细胞等,重组蛋白的产生尚可利用转基因动物的乳腺或者植物产生,产生的重组蛋白作为生物制药的产物,在医学中作用显著。利用基因工程技术,可以使细胞或者动物本身变成“批量生产药物的工厂”。
以利用转基因动物的乳腺表达重组蛋白为例:其方法是将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,通过显微注射等方法,导入哺乳动物(哺乳动物才会泌乳)的受精卵中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后,可以通过分泌的乳汁来生产所需要的蛋白质药品,因而称为动物乳腺生物反应器或乳房生物反应器。目前,科学家已在牛和山羊等动物的乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和α-抗胰蛋白酶等重要的医药产品。
目前重组蛋白在制药工业上主要是指表达获得的细胞因子、凝血因子或者人工设计的蛋白分子。
重组牛β-1,4-半乳糖转移酶1 Recombinant bovine Beta-1,4-galactosyltransferase 1
重组蛋白种类
按功能分,可分为以下几种:
1.白细胞介素(Interleukin,IL)
由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子。由于最初是由白细胞产生且又在白细胞间发挥作用,所以得名,现仍沿用此名。
2.干扰素(interferon,IFN)
具有干扰病毒复制的能力,故得名。其具有十分广泛的生物活性,在免疫应答和免疫调节中发挥重要作用,也是主要的促炎细胞因子之一。干扰素分为:I型(7种,如IFN-α和IFN-β)和II型(仅有IFN-Y)
3.肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)
由于在体内外均可直接杀伤肿瘤细胞而得名。其家族成员约有30个。
主要成员:
1) TNF-α,一种单核因子主要由单核细胞和巨噬细胞产生
2) TNF-β,一种淋巴因子,主要由淋巴细胞、NK细胞等产生,其生物学活性与TNF-α相类似
4.集落刺激因子(colony stimulating factor,CSF)
一组在体内外均可选择性刺激造血祖细胞增殖、分化并形成某一谱系细胞集落的细胞因子,包括巨噬细胞CSF、粒细胞CSF、巨噬细胞/粒细胞CSF、干细胞因子等。
5.生长因子(growth factor,GF)
一类可介导不同类型细胞生长和分化的细胞因子,根据其功能和所作用细胞的不同,分别命名为转化生长因子(TGF)、神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等。
6.趋化性细胞因子(chemokine)
一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子家族,可由白细胞和某些组织细胞分泌,是一个包括60多个成员的蛋白质家族。大部分成员含4个保守的半胱氨酸(cysteine,C)根据其N端半胱氨酸的排列方式,可分为CXC、CC、C、CX3C四个亚族 。
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文献和实验促甲状腺激素 thyrotropic hormone,thy-roid stimulating hormone,thyrotropin
缩写为 TSH。是脑下垂体前叶分泌的,是可使甲状腺滤胞生长并促进其分泌机能的激素。能活化参于甲状腺球蛋白代谢的各种酶。脑下垂体前叶的这种激素的分泌是由来自视丘下部的 TRF(促田状腺激素释放因子)促进的。牛的 TSH分子量约 2万 8千,沉降系数为 2.8S的糖蛋白,由 90个以及 110个氨基酸组成的α和β的亚单位组成。在α亚单位中的糖是岩藻糖 0.3-0.4(分子量每 1万 4千的残基数中),甘露糖 5.6,半乳糖 0.2,葡糖胺 6.4,半乳糖胺 2.7;在β亚单位中含
E.coli 的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动子序列P及一个调节基因I.I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态. 在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激活蛋白(CAP)结合位点.由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表达 。 在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏
:1、 受体菌必须是限制与修饰系统缺陷的菌株;2、 根据质粒基因型和受体菌基因型互补原则而定;重组子的筛选方法常用的有两种方法:1、 抗生素筛选法:菌株为某种抗生缺陷型, 而质粒上带有该抗性基因(如氨苄青霉素, 卡拉霉素等)这样只有转化子才能在含该抗生素的培养基上长出。本实验利用抗生筛选转化子。2、 互补法:现在使用的许多载体(如PUC系列)有含有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酸基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸偏码区。这个偏码区中插入一个多克隆位点。受体菌则含编码β-半乳糖
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