Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-

Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8试剂盒检测原理

Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan） 。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。

CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。

Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8试剂盒保存条件：

4℃干燥避光保存，有效期一年（推荐）。-20℃干燥避光保存，有效期二年。

CCK方法的优势

表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK法

甲臜产物的水溶性

差（需加有机溶剂溶解后再检测）

好

好

好

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

高

很高

很高

高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

高，细胞形态完全消失

很低，细胞形态不变

很低，细胞形态不变

很低，细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷



1、酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰；

2、细胞毒性非常低，因此加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。


Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8试剂盒CCK试剂盒操作说明

一. 制作标准曲线（测定细胞具体数量）

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。

2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）

二. 细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2）。

2、向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

三. 细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。

4、向每孔加入10μL CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。

注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

Note：

1）建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

2）有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。

3）白细胞可能需要培养较长时间。

4）当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

5）如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。

6）培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

活力计算：

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100
A（加药）：具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0加药）：具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
Cell Counting Kit (CCK-8) CCK-8试剂盒yb-036 人胃癌细胞
yb-037 人胃癌细胞
yb-038 绿色荧光蛋白标记人胃癌细胞
yb-039 人胃癌细胞
yb-040 人胃癌顺铂耐药株
yb-041 人结肠癌细胞
yb-042 人胚胎肠粘膜细胞
yb-043 人结肠癌细胞
yb-044 人结肠癌细胞
yb-045 人结肠癌细胞
yb-046 人结直肠癌细胞
yb-047 人结肠腺癌细胞
yb-048 耐长春新碱结肠癌细胞系
yb-049 人结肠腺癌细胞
yb-050 人十二指肠腺癌细胞
yb-051 人结肠癌细胞
yb-052 人结肠癌细胞
yb-053 人结肠癌细胞
yb-054 人结肠癌细胞
yb-055 人结肠癌细胞
yb-056 结直肠癌细胞
yb-057 人结肠癌细胞
yb-058 人结肠癌细胞
yb-059 人结肠癌细胞
yb-060 人结肠癌细胞
yb-061 人结肠癌转基因细胞
yb-062 人结肠癌转基因细胞
yb-063 人大肠癌细胞
yb-064 人大肠癌细胞
yb-065 人大肠癌细胞