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上皮样
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干冰运输
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贴壁生长
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品描述
细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
产品组分
编号
组分
规格
保存
40754-A
清洗液A（Washing Buffer A）
60 ml
4ºC保存
40754-B
固定液B（Fixative Solution B）
60 ml
4ºC保存
40754-C
酸性液C（Acid Solution C）
120 ml
4ºC保存
40754-D
稀释液D（Dilution Buffer D）
38 ml
4ºC避光保存
40754-E
染色液E（Staining Solution E）
2 ml
-20ºC避光保存
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项
1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2） 本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。
3） 染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。
4） X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
5） 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。
6） 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
7） 本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可（参考表2）。
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用方法
1.实验前的准备工作：
1) 染色工作液配制
实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温15~20min。其中X-Gal溶液C最好置入冰槽里等待溶化。根据以下染色工作液配方表（表1），实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入37ºC恒温水槽里预热，即为染色工作液。
表1 染色工作液配方表
染色液D
10μl
染色液E
10μl
染色液F
930μl
X-Gal溶液C
50μl
注意：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。
2）不同体系染色工作液用量
本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2 调整染色工作液用量：
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒细胞培养类型
建议处理液 用量
载玻片（组织切片）
1 ml
载玻片培养皿
1 ml
35 mm 培养皿
1 ml
96 孔培养板
0.1 ml
48 孔培养板
0.2 ml
24 孔培养板
0.25 ml
12 孔培养板
0.5 ml
6 孔培养板
1.0 ml
25 m2培养瓶
3.0 ml
注意：以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于6孔板，足够做100个样本的检测；对于24孔板，足够做400个样本的检测；对于96孔板，足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。
2. 6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：
1） 吸除细胞培养液，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。
注意：对于其他类型的培养板，固定液用量参照此比例进行操作。
2） 吸除固定液B，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
3） 吸除清洗液A，每孔加入1ml预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。
4） 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
3. 悬浮细胞染色：
1） 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。
2） 离心，吸除细胞固定液，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
3） 离心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
4） 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。
注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5） 取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
4. 组织切片染色：
1） 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；
2） 加入适当体积的固定液B，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。
3） 用清洗液A浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；
4） 吸除清洗液A，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
5） 37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒yb-1186 HO-8910(卵巢癌细胞)
yb-1187 Tca-8113(舌鳞癌细胞)
yb-1188 HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞（高分化）)
yb-1189 A-431(表皮癌细胞)
yb-1190 HeLa 229(宫颈癌细胞)
yb-1191 CBRH-7919(肝癌细胞)
yb-1192 RH-35(肝癌细胞)
yb-1193 SHZ-88(乳腺癌细胞)
yb-1194 MLTC-1(睾丸间质细胞瘤细胞)
yb-1195 L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系)
yb-1196 F9(畸胎瘤细胞)
yb-1197 LLC Lewis(肺癌细胞)
yb-1198 C127(乳腺肿瘤细胞)
yb-1199 MFC(胃癌细胞)
yb-1200 B16(黑色素瘤细胞)
yb-1201 B16(黑色素瘤细胞)
yb-1202 P815(肥大细胞瘤细胞)
yb-1203 S-180(腹水瘤细胞)
yb-1204 RM-1(前列腺癌细胞)
yb-1205 SAC-IIC3(腹水瘤细胞)
yb-1206 NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞)
yb-1207 SAC-IIB2(腹水瘤细胞)
yb-1208 Hepa 1-6(肝癌细胞)
yb-1209 P388D1(淋巴瘤细胞)
yb-1210 P3X63Ag8.653(骨髓瘤细胞)
yb-1211 YAC-1(淋巴瘤细胞)
yb-1212 P3X63Ag8(骨髓瘤细胞)
yb-1213 EL4. IL-2(淋巴瘤细胞)
yb-1214 SP2/0(骨髓瘤细胞)
yb-1215 EL4(淋巴瘤细胞)
yb-1216 P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1](骨髓瘤细胞)
yb-1217 PIEC(猪髋动脉内皮细胞)
yb-1218 CRFK(猫肾细胞)
yb-1219 EBTr (NBL-4)(牛胚气管细胞)
yb-1220 F81(猫肾细胞)
yb-1221 Mv.1.Lu(NBL-7)(貂肺上皮细胞)
yb-1222 MDCK (NBL-2)(狗肾细胞)
细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicative senescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
产品组分
编号
组分
规格
保存
40754-A
清洗液A（Washing Buffer A）
60 ml
4ºC保存
40754-B
固定液B（Fixative Solution B）
60 ml
4ºC保存
40754-C
酸性液C（Acid Solution C）
120 ml
4ºC保存
40754-D
稀释液D（Dilution Buffer D）
38 ml
4ºC避光保存
40754-E
染色液E（Staining Solution E）
2 ml
-20ºC避光保存
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项
1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2） 本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。
3） 染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。
4） X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
5） 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。
6） 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
7） 本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可（参考表2）。
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用方法
1.实验前的准备工作：
1) 染色工作液配制
实验开始前，将试剂盒内各组分从冰箱内取出，置于室温回温15~20min。其中X-Gal溶液C最好置入冰槽里等待溶化。根据以下染色工作液配方表（表1），实验体系类型，检测样本数，统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后，置入37ºC恒温水槽里预热，即为染色工作液。
表1 染色工作液配方表
染色液D
10μl
染色液E
10μl
染色液F
930μl
X-Gal溶液C
50μl
注意：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。
2）不同体系染色工作液用量
本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2 调整染色工作液用量：
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒细胞培养类型
建议处理液 用量
载玻片（组织切片）
1 ml
载玻片培养皿
1 ml
35 mm 培养皿
1 ml
96 孔培养板
0.1 ml
48 孔培养板
0.2 ml
24 孔培养板
0.25 ml
12 孔培养板
0.5 ml
6 孔培养板
1.0 ml
25 m2培养瓶
3.0 ml
注意：以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于6孔板，足够做100个样本的检测；对于24孔板，足够做400个样本的检测；对于96孔板，足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。
2. 6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：
1） 吸除细胞培养液，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。
注意：对于其他类型的培养板，固定液用量参照此比例进行操作。
2） 吸除固定液B，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
3） 吸除清洗液A，每孔加入1ml预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。
4） 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
3. 悬浮细胞染色：
1） 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。
2） 离心，吸除细胞固定液，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
3） 离心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
4） 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。
注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
5） 取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
4. 组织切片染色：
1） 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；
2） 加入适当体积的固定液B，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。
3） 用清洗液A浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；
4） 吸除清洗液A，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
5） 37℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
注意：37℃孵育不能在CO2培养箱中进行，因其内高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒yb-1186 HO-8910(卵巢癌细胞)
yb-1187 Tca-8113(舌鳞癌细胞)
yb-1188 HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞（高分化）)
yb-1189 A-431(表皮癌细胞)
yb-1190 HeLa 229(宫颈癌细胞)
yb-1191 CBRH-7919(肝癌细胞)
yb-1192 RH-35(肝癌细胞)
yb-1193 SHZ-88(乳腺癌细胞)
yb-1194 MLTC-1(睾丸间质细胞瘤细胞)
yb-1195 L6565(小鼠L6565白血病克隆细胞系)
yb-1196 F9(畸胎瘤细胞)
yb-1197 LLC Lewis(肺癌细胞)
yb-1198 C127(乳腺肿瘤细胞)
yb-1199 MFC(胃癌细胞)
yb-1200 B16(黑色素瘤细胞)
yb-1201 B16(黑色素瘤细胞)
yb-1202 P815(肥大细胞瘤细胞)
yb-1203 S-180(腹水瘤细胞)
yb-1204 RM-1(前列腺癌细胞)
yb-1205 SAC-IIC3(腹水瘤细胞)
yb-1206 NG108-15 [ 108CC15 ](小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞)
yb-1207 SAC-IIB2(腹水瘤细胞)
yb-1208 Hepa 1-6(肝癌细胞)
yb-1209 P388D1(淋巴瘤细胞)
yb-1210 P3X63Ag8.653(骨髓瘤细胞)
yb-1211 YAC-1(淋巴瘤细胞)
yb-1212 P3X63Ag8(骨髓瘤细胞)
yb-1213 EL4. IL-2(淋巴瘤细胞)
yb-1214 SP2/0(骨髓瘤细胞)
yb-1215 EL4(淋巴瘤细胞)
yb-1216 P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1](骨髓瘤细胞)
yb-1217 PIEC(猪髋动脉内皮细胞)
yb-1218 CRFK(猫肾细胞)
yb-1219 EBTr (NBL-4)(牛胚气管细胞)
yb-1220 F81(猫肾细胞)
yb-1221 Mv.1.Lu(NBL-7)(貂肺上皮细胞)
yb-1222 MDCK (NBL-2)(狗肾细胞)
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