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- 2025年11月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 供应商：
上海古朵生物有限公司
- 检测范围：
科研
- 检测方法：
酶联检测
- 适应物种：
小鼠
- 规格：
48T/96T
抗心肌抗体ELISA
货号：GD-NB6285
规格:48T/96T
运输条件:2-8℃低温运输，用干冰或者冰袋低温运输。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等。
抗心肌抗体ELISA洗涤方法:
1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μl，注入与吸出间隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μl，浸泡1-2分钟，吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制)，酶标板加上覆膜，37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约350μl /每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl，加上覆膜，37℃温育1小时。
5.弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液100μl，酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止)。
7.每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
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文献和实验ELISA 实验失败可能由多种因素造成。在实验前阅读并充分了解产品说明书，可以一定程度上避免出现意想不到的结果。参考以下提示来避免实验出现问题。 1. 检查试剂盒的保质期，保证所有试剂按说明书上的建议正确保存； 2. 检查试剂溶液是否存在不稳定或降解迹象，如沉淀或变色等； 3. 底物溶液应为无色； 4. 试剂制备和保存时应使用干净的一次性塑料吸量管、枪头和容器。每次加液（样品、标准品及其他试剂）时，及时更换枪头，避免交叉污染； 5. 确保孵育时间和温度与规定的高度一致； 6. 盒中试剂不能
作为 ELISA 的最后一步，检测结果的计算对整个实验十分重要。 以夹心法为例。 1. ELISA 的样本通常要设置 1~2 个复孔进行检测，分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的 20%。 2. 样本的 OD（吸光度）平均值要减去标准品浓度为 0 时的 OD 平均值。 3. 建立标准曲线 在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线（X 轴上为标准品浓度，Y 轴为对应的 OD 值）。推荐使用 origin 软件。 详细步骤如下： 第一步: 输入 OD 值
一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中
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