Cell Cycle and Apoptosis Analy

Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒产品描述

细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)采用了经典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡的分析。

碘化丙啶 (Propidium，PI) 是一种双链DNA荧光染料，其嵌入双链DNA后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。细胞内的DNA被PI染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，根据DNA含量的分布情况，进行细胞周期和细胞凋亡分析。

PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA片段化 (DNA fragmentation) 导致部分基因组DNA片断在染色过程中丢失，因此凋亡细胞PI染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1，在流式检测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰，即凋亡细胞峰。

细胞凋亡也可以用流式细胞仪观察细胞光散射的变化来检测。 细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核碎裂，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。凋亡前期，染色质皱缩，细胞密度增加，前向角光散射色显著降低。凋亡后期，细胞产生凋亡小体，前向角光散射和侧向角光散色都显著降低。

本试剂盒通常应用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测。如果用于组织的细胞周期与细胞凋亡检测，则必须把组织消化成单细胞状态，才可以进行检测。

Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒产品组分

组分

产品编号/规格

40301ES50（50T）

40301ES60(60T)

RNaseA Solution

1 ml

2 ml

PI Staining Solution

20 ml

40 ml

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品-20 ºC避光保存。

注意事项

1) 本试剂盒需要使用流式细胞仪进行检测。

2) 细胞处理需轻柔，尽量避免人为的损伤细胞。

3) 为防止不同批次细胞在实验时所处周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理。实验细胞应处于对数生长期，贴壁细胞一般在50～80％汇合度时收集为宜。

4) 400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，留下单细胞，否则会出现人为的多倍体干扰。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞轻弹以分散，再进行染色。

5) 荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒操作流程

1. 收集样本细胞，细胞数量在1 × 105 以内。

a) 贴壁细胞：小心吸弃细胞培养液，用胰酶消化细胞，制备单细胞悬液。1000g离心3-5分钟，沉淀细胞。加入约1ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50 μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

b) 悬浮细胞：1000g离心3-5分钟，沉淀细胞。加入约1 ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50 μl左右的PBS，以避免吸走细胞。轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

c) 组织细胞：将组织块用剪刀剪成尽量小的小块后，用0.25%的胰酶消化0.5-1个小时，经过200-400目筛网过滤得到单细胞悬液。1000g离心3-5分钟，沉淀细胞。加入约1 ml冰浴预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。

2. 细胞固定：用预冷的75％乙醇-20℃固定1 小时。固定时，在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS充分悬浮细胞，之后缓慢加入无水乙醇，使终浓度为70-75%。

3. 用冷PBS 洗涤细胞一次。

4. 用200-500 μl 冷PBS 重悬细胞。

5. 加入20 μl RNase A Solution，37℃水浴30分钟。

6. 400目筛网过滤。

7. 加入400 μl PI Staining Solution，轻轻混匀后4℃避光孵育30-60分钟。

8.流式细胞仪检测，在激发波长488 nm波长处检测，同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒yb-1334 NCI-N87(人胃癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1335 DT40(鸡淋巴瘤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb1000 人脑微血管内皮细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb1003 人脉络丛内皮细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb1019 人神经束膜细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
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yb1025 人心肌细胞 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb1026 人心肌细胞-成人 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周