GSTSep Glutathione Agarose Re

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）产品描述

本品GSTSep Glutathione Agarose Resin是以4%琼脂糖凝胶为基质，通过12个原子的间隔臂，用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高，使其每毫升基质可承载＞20mg GST融合蛋白。

此外，本品特异性好，性价比高，可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。

产品性质

孔径（Bead size）

45-165µm

载量（Capacity）

＞20mg GST protein/ml 基质（40kDa）

最大压力（PressureMax）

0.1 MPa, 1bar

pH稳定范围（pH range）

3-12

储存缓冲液（Buffer）

20%乙醇

运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存，有效期2年。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）

使用方法

1 缓冲液的准备

所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。

结合/洗杂缓冲液：PBS，pH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH7.4)

洗脱缓冲液：50mM Tris-HCl, 10mM 还原型谷胱甘肽，pH 8.0

【注】：结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10mM DTT。

2 样品准备

样品在上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，减少杂质以防阻塞柱子。

3蛋白纯化

1）将GSTSep Glutathione Agarose Resin装入合适的层析柱，用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子，使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。

2）Resin平衡后，加入蛋白样品，使其与Resin充分接触，提高目的蛋白回收率，收集流出液。

3）用10-15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。

4）使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液，收集洗脱液，即目的蛋白溶液。

5）依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料，最后用5倍柱体积的20%的乙醇平衡，然后保存在等体积的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被细菌污染。

4 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品（包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等）利用SDS-PAGE进行检测，判定其纯化效果。

5 填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集，会造成流速和结合载量性能下降，此时需对填料进行清洗。

1）去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS，pH7.4清洗。

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）

附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

按照步骤5对填料进行清洗。

裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤，或离心去除。

样品太黏稠

样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI （终浓度为5µg/ml），Mg2+(终浓度1mM)，冰上孵育10-15min

缓冲液太黏稠

有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。

洗脱组分中无目的蛋白

GST标签蛋白变性了

使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。

过度的裂解使目的蛋白变性

目的蛋白聚集产生沉淀

在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10mM

融合蛋白改变了GST的构象，影响了目的蛋白的结合力

测定pGEX中GST的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力。

降低结合温度至4℃，充分清洗

柱子平衡时间太短，目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范围内结合

用pH6.5-pH8.0的buffer进行充分的平衡，如PBS.

目的蛋白没有完全洗脱下来

洗脱体积太少

增加洗脱液体积，减小洗脱流速。

洗脱液中谷胱甘肽浓度太低

增加洗脱液中谷胱甘肽浓度，可尝试用50mM Tris-HCl, 20-40mM还原型谷胱甘肽pH8.0洗脱

低pH影响洗脱

在不增加洗脱液中谷胱甘肽量时，提高洗脱液中pH至pH8-9会有改善

增加洗脱液中离子强度，如0.1-0.2M NaCl

洗脱液中谷胱甘肽被氧化

使用新鲜配制的洗脱液

加入DTT

非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱

洗脱液中加入非离子型洗涤剂，如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20

电泳或western blot检测中发现多条带

Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来

Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物，可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl, 2mM ATP, 10mM MgSO4, pH 7.4在37℃加热10min去除。

可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白

GST融合蛋白已经发生降解

在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF

可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）

细胞破碎过度

减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化。

共价共纯化

包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化，如：DnaK(Mr～70000), DnaJ(Mr～37000), GrpE(Mr ～40000), GroEL(Mr～57000), GroES(Mr ～10000)

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂（用于GST标签蛋白纯化）yb-2668R Bone sialoprotein骨涎蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-1488R Bim细胞死亡调解子抗体 浓度1mg/ml
yb-1489R BIRC6Apollon凋亡抑制蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-1628R BONZO细胞表面趋化因子受体6抗体 浓度1mg/ml
yb-1195R beta endorphinβ-内啡肽/β endorphin抗体 浓度1mg/ml
yb-1509R BMPR1A骨成型蛋白受体1A抗体 浓度1mg/ml
yb-1336R Bcl-xLBcl-xL蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-1337R phospho-Bcl-xL (Ser62)磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗体 浓度1mg/ml
yb-1304R Bad相关死亡促进因子Bad抗体 浓度1mg/ml
yb-9519R BPGM红细胞2,3 - 二磷酸甘油酸合成酶抗体 浓度1mg/ml
yb-2229R Brucella布氏杆菌菌体蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-3373R phospho-B-Raf (Ser444)磷酸化B-Raf抗体 浓度1mg/ml
yb-3374R phospho-B-Raf (Ser602)磷酸化B-Raf抗体 浓度1mg/ml
yb-3542R PNK1多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗体 浓度1mg/ml
yb-0803R BRCA1乳腺癌易感基因1抗体 浓度1mg/ml
yb-1284R BakBcl-2同源拮抗剂抗体 浓度1mg/ml
yb-1063R beta 3 Adrenergic Receptorβ3肾上腺素能受体抗体 浓度1mg/ml
yb-4865R BNP脑钠素/利钠肽抗体 浓度1mg/ml
yb-8726R BZW2BZW2蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-8675R BDKRB1缓激肽B1受体抗体 浓度1mg/ml
yb-4775R BK channel钙激活钾通道蛋白α1抗体 浓度1mg/ml
yb-11041R Bestrophin 2卵黄状黄斑病蛋白2抗体 浓度1mg/ml
yb-7905R BRSK1丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶SAD-B抗体 浓度1mg/ml
yb-7779R BRD7鼻咽癌相关转录调节蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-11989R Creatine kinase B type脑肌酸激酶BCK抗体 浓度1mg/ml
yb-7980R beta glucuronidaseβ葡萄糖醛酸苷酶抗体 浓度1mg/ml
yb-11462R BCAS1乳腺癌相关蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-7586R Bcl 2 like protein 9Bcl2样凋亡蛋白9抗体 浓度1mg/ml
yb-8398R BTBD10BTB/POZ结构域蛋白10抗体 浓度1mg/ml
yb-8400R BTBD17BTB/POZ结构域蛋白17抗体 浓度1mg/ml
yb-8401R BTBD19BTB/POZ结构域蛋白19抗体 浓度1mg/ml
yb-8436R BXDC2BXDC2蛋白抗体 浓度1mg/ml