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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 形态:
液态/粉状
- 保存条件:
-20℃
- 克隆性:
多克隆
- 适应物种:
人,大鼠,小鼠,兔.......
- 宿主:
Goat,Rabbit,Mouse
- 应用范围:
科研使用
- 浓度:
1mg/ml
- 靶点:
来电咨询
- 抗体英文名:
RIPA Lysis Buffer (Strong)
- 抗体名:
RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强)
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。
RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,并含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。
运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。
-20℃保存,一年有效。尽量避免反复冻融,建议分装后使用。
RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强)注意事项
1)需自备PMSF。
2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3)用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(YEASEN CAT NO.20201ES76)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
(一) 培养细胞样品:
1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250μl 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μl或250μl。
(二) RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强)组织样品:
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20mg组织加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液(强)yb-12935R CSTF3细胞分化促进因子77抗体 浓度1mg/ml
yb-12936R CSTL1半胱氨酸蛋白酶抑制剂样蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-12937R CTBSCTBS蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-12938R CSGALNACT1硫酸软骨素β1/β-1,4-GalNAc-T抗体 浓度1mg/ml
yb-12939R CSGLCAT硫酸软骨素聚合酶3抗体 浓度1mg/ml
yb-12940R Placental lactogen I+II胎盘催乳素1/2抗体 浓度1mg/ml
yb-12941R CSK酪氨酸激酶C-SRC抗体 浓度1mg/ml
yb-12942R phospho-CSK (Ser364)磷酸化酪氨酸激酶C-SRC抗体 浓度1mg/ml
yb-12943R CSNK1A1L酪蛋白激酶1/casein kinase Iα抗体 浓度1mg/ml
yb-12944R CSP半胱氨酸延伸蛋白α抗体 浓度1mg/ml
yb-12945R CSPS磺基转移酶CSPS抗体 浓度1mg/ml
yb-12946R CSRP2富含半胱氨酸蛋白2抗体 浓度1mg/ml
yb-12948R CRTAC1软骨酸性蛋白1抗体 浓度1mg/ml
yb-12947R CSRP2BP富含半胱氨酸蛋白结合蛋白抗体 浓度1mg/ml
yb-12950R CRTC3CREB调节转录激活因子3抗体 浓度1mg/ml
yb-12949R CRTAP软骨相关蛋白CRTAP抗体 浓度1mg/ml
yb-15000R C1orf1001号染色体开放阅读框100抗体 浓度1mg/ml
yb-15002R C1orf1041号染色体开放阅读框104抗体 浓度1mg/ml
yb-15008R C1orf1121号染色体开放阅读框112抗体 浓度1mg/ml
yb-15009R C1orf1131号染色体开放阅读框113抗体 浓度1mg/ml
yb-15010R C1orf114 1号染色体开放阅读框114抗体 浓度1mg/ml
yb-15005R C1orf1091号染色体开放阅读框109抗体 浓度1mg/ml
yb-10232R CD93CD93抗体 浓度1mg/ml
yb-15006R C1orf110 1号染色体开放阅读框110抗体 浓度1mg/ml
yb-15007R C1ORF111 1号染色体开放阅读框111抗体 浓度1mg/ml
yb-15004R C1orf1061号染色体开放阅读框106抗体 浓度1mg/ml
yb-10099R CYP11A1细胞色素P450 11A1抗体 浓度1mg/ml
yb-12256R phospho-CXCR4 (Ser339)磷酸化细胞表面趋化因子受体4抗体 浓度1mg/ml
yb-12257R phospho-CXCR2 (Ser347)磷酸化细胞表面趋化因子受体2抗体 浓度1mg/ml
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文献和实验1ml RIPA buffer contains 35μl proteinase inhibitor(sigma cat no P8340) and 10μl phosphatase inhibitorRIPA buffer 最终浓度1M Tris-HCl pH7.5) 5 ml 50mMNaCl 0.87g 0.15 MNa-deoxycholale 0.1g (1%)0.5M EDTA(pH8.0) 0.8mlNaF 41 mgNonidet P40 1 ml (1%)Aprotinin
Jacobs:Protocol Total Protein Isolation Using RIPA Lysis Buffer
Procedure Each group will receive one tissue culture dish containing 3T3 fibroblasts Label 2 microcentrifuge tubes: Protein Group# One person will prepare RIPA Lysis buffer for the entire class: Add 10 μ
-3, caspase-7, parp and GD1 检测➤ 主要发现p24, p20 存在于 RIPA 提取的蛋白中,但 Laemmli 裂解液提取的蛋白中却不存在。证明了 RIPA buffer 提取蛋白时会人工激活 caspase-3 and caspase-7。用 Laemmli 缓冲液加超声处理可进一步从 RIPA 不可溶性组分中提取出蛋白。例二.Kevin A. Janes,(2016).An Analysis of Critical Factors for Quantitative
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