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上海信裕
1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液，10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶（预热20分钟左右）2ml消化，轻轻摇晃，Avidin抗生素蛋白直至肉眼见单层细胞呈块状脱落（或在显微镜下观察细胞之间分离），立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化，轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清，加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中，每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液，正常情况下2-3天就可以长满，期间不用换液。
Avidin抗生素蛋白的传代方法：首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，Avidin抗生素蛋白再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶底为宜。放到倒置显微镜下观察变化，一旦发现细胞开始变园收缩，大约1－3分钟时间，必要时可以吹打帮助细胞分散，就立即加入培养基中和胰酶，如有EDTA最好要离心（800rpm,5min)，弃上清夜，Avidin抗生素蛋白再加入完全培养基吹匀，再分瓶，一般一瓶可以分2－3瓶。放入5%的CO2培养箱，37度培养24小时后观察。
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文献和实验存在于卵白中的碱性糖蛋白，因它贪婪地（avidly）与生物素结合，故有此名（ avidin）。给动物以生的卵白则产生生物素缺乏症，因为生物素蛋白与生物素结合，使之失活。分子量为 68300，含 4个亚单位。在体外（试管中）对含生物素的酶具有特异的抑制作用。
生物素亲和素(又称抗生物素)系统(biotin avidin system,BAS)标记抗体的技术是 20 世纪 70 年代后期发展起来的一种新的免疫检测方法。 由于亲和素与生物素间的亲和力极强，结合迅速，且极其稳定，生物素标记抗体和酶的标记率高，又不影响蛋白的活性，使 BAS 标记技术比常规酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技术有着更高的灵敏度，为微量抗原、抗体的检测开辟了新的途径。近年来，在 BAS 检测中多用链霉亲和素“streptavidin,SA”，它是链霉菌培养过程中的分泌物，完整的链霉
加入六孔板中； 4~6h 后换成正常血清培养基（忌放抗生素），在培养箱内培养； 48h 后提取 RNA 或者 72h 提取蛋白，或者 48h 后进行后续相关实验。 三、流程图 四、答疑 师兄， 转染为什么不能加抗生素？ 答：抗生素，比如青霉素和链霉素，一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂（Opti-MEMI）增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低下。所以在转染的时候不允许加入抗生素。 师兄，转不进去怎么办？ 答：有以下几种情况： 1）转染
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