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上海信裕
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品描述
细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicativesenescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性，但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感，特异性高。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
产品组分
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项
表1 染色工作液配方表
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒注意：配制染色工作液时需使用聚丙烯（polypropylene）容器或玻璃容器，不宜使用聚苯乙烯（polystyrene）容器，对于二者的判定：聚丙烯容器可高压灭菌，而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌，一旦高温高压处理就会严重变形。但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行，如细胞培养常用的6孔板。
2）不同体系染色工作液用量
本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2调整染色工作液用量：
注意：以上用量仅作为参考，对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量，本试剂盒对于6孔板，足够做100个样本的检测；对于24孔板，足够做400个样本的检测；对于96孔板，足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度，大小对染色液用量的要求明显不同，必须做合理用量调整。
5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
细胞衰老（Cell senescence）是细胞控制其生长潜能的保障机制，一般含义是复制衰老（Replicativesenescence，RS），指正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，此时细胞虽然是存活的，但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括：1）不可逆的生长停滞；2）与衰老相关的β-半乳糖苷酶（senescence associated β-galactosidase, SA β-gal）的活化。作为溶酶体内的水解酶，通常在pH 4.0的条件下表现活性，但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性，且随着传代次数的增加，细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于活性变化的生物学特征而设计的，专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物，通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达，催化底物生成深蓝色产物，从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定，参数经优化，着色敏感，特异性高。仅对衰老细胞进行染色，不会染色衰老前的细胞（presenescent cells）、静止期细胞（quiescent cells）、永生细胞（immortal cells）或肿瘤细胞。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 | 保存 |
| 40754-A | A（Washing Buffer A） | 100 ml | 4ºC或-20℃保存 |
| 40754-B | B（Fixative Solution B） | 100 ml | -20℃保存 |
| 40754-C | X-Gal溶液C（X-Gal Solution C） | 5 ml | -20℃避光保存 |
| 40754-D | 染色液D（Staining Solution D） | 1 ml | -20℃保存 |
| 40754-E | 染色液E（Staining Solution E） | 1 ml | -20℃保存 |
| 40754-F | 染色液F（Staining Solution F） | 100 ml | -20℃保存 |
冰袋运输。-20℃保存，一年有效，其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性，操作时请注意小心防护。
- 染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀，属正常现象，充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解，之后用于染色实验。
- X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存，但也需避免光照。
- 细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3 h即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。
- 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值，不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值，导致染色失败。
- 本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板，只需按照一定的比例调整工作液用量即可（参考表2）。
- 实验前的准备工作：
- 染色工作液配制
表1 染色工作液配方表
| 染色液D | 10μl |
| 染色液E | 10μl |
| 染色液F | 930μl |
| X-Gal溶液C | 50μl |
2）不同体系染色工作液用量
本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35 mm 培养皿，和各种孔数的细胞培养板，可参考下表2调整染色工作液用量：
| 细胞培养类型 | 建议处理液 用量 |
| 载玻片（组织切片） | 1 ml |
| 载玻片培养皿 | 1 ml |
| 35 mm 培养皿 | 1 ml |
| 96 孔培养板 | 0.1 ml |
| 48 孔培养板 | 0.2 ml |
| 24 孔培养板 | 0.25 ml |
| 12 孔培养板 | 0.5 ml |
| 6 孔培养板 | 1.0 ml |
|
3.0 ml |
- 6孔细胞培养板染色（贴壁细胞）：
- 吸除细胞培养液，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。
- 吸除固定液B，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
- 吸除清洗液A，每孔加入1ml预热的染色工作液，覆盖整个生长表面。
- 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色，可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
5） 普通光学显微镜下观察和计数：表达SA β-gal的细胞为阳性细胞，呈现蓝色。如不能及时观察计数，可以去除染色工作液，加入2ml 清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天，或者加入封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
- 悬浮细胞染色：
- 离心收集细胞至1.5ml离心管内，用1ml清洗液A洗涤1次，加入1ml 固定液B，覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动，以避免细胞结成团块。
- 离心，吸除细胞固定液，用1ml清洗液A洗涤细胞3次，每次3min。
- 离心，吸除清洗液A，每管加入0.5-1ml预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
- 37℃孵育3 h～16 h，或直到细胞呈现蓝色（注：避免液体蒸发）。
- 取部分染色好的细胞，滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下观察和计数。如不能及时观察计数，可以离心，去除染色工作液，加入1ml清洗液A或PBS缓冲液，4℃可以保存数天。也可取细胞用于涂片，加上封片剂封片后，4℃可保存较长时间。
- 组织切片染色：
- 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行；
- 加入适当体积的固定液B，以充分盖住组织为宜，室温固定不少于15min。
- 用清洗液A浸泡洗涤组织3次，每次不少于5min；
- 吸除清洗液A，加入适当量的预热的染色工作液。染色工作液的配制方法参见表1。
- 7℃孵育过夜，可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发，最好把整个切片浸泡在染色工作液中。
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒
xy-axbz-023 小鼠骨髓瘤细胞 FO 规格25毫升/株.
xy-axbz-024 小鼠淋巴瘤细胞 Yac-1 规格25毫升/株.
xy-axbz-025 小鼠淋巴瘤细胞 EL4 规格25毫升/株.
xy-axbz-026 小鼠淋巴瘤细胞 EL4.IL-2 规格25毫升/株.
xy-axbz-027 小鼠黑色素瘤细胞 B16F1 规格25毫升/株.
xy-axbz-028 鼠黑色素瘤细胞系 B16-Fo 规格25毫升/株.
xy-axbz-029 小鼠黑色素瘤高转移细胞 B16F10 规格25毫升/株.
xy-axbz-030 小鼠黑色素瘤细胞 B16BL6 规格25毫升/株.
xy-axbz-031 小鼠黑色素瘤细胞 B16 规格25毫升/株.
xy-axbz-032 小鼠SRSV转化的3T3细胞 SRSV/3T3 规格25毫升/株.
xy-axbz-033 小鼠胚胎成纤维细胞 BALB/3T3 clone A31 规格25毫升/株.
xy-axbz-034 小鼠肝癌细胞 H22 规格25毫升/株.
xy-axbz-035 小鼠肝癌细胞 Hepa 1-6 规格25毫升/株.
xy-axbz-036 大鼠肝癌细胞 CBRH-7919 规格25毫升/株.
xy-axbz-037 大鼠肝癌细胞 RH-35 规格25毫升/株.
xy-axbz-038 小鼠畸胎瘤细胞 F9 规格25毫升/株.
xy-axbz-039 小鼠畸胎瘤细胞 P19 规格25毫升/株.
xy-axbz-040 大鼠神经胶质瘤细胞 C6 规格25毫升/株.
xy-axbz-041 小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a 规格25毫升/株.
xy-axbz-042 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 PC12 规格25毫升/株.
编号 中文 英文名称 规格25毫升/株.
xy-axbz-043 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化) PC-12 规格25毫升/株.
xy-axbz-044 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化) PC-12 规格25毫升/株.
xy-axbz-045 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) PC-12 规格25毫升/株.
xy-axbz-046 小鼠睾丸间质细胞瘤细胞 MLTC-1 规格25毫升/株.
xy-axbz-047 小鼠前列腺癌细胞 RM-1 规格25毫升/株.
xy-axbz-048 小鼠肛门肉瘤细胞 S-180 规格25毫升/株.
xy-axbz-049 鼠肝星形细胞 HSC-T6 规格25毫升/株.
xy-axbz-050 大鼠正常肝细胞 BRL-3A 规格25毫升/株.
xy-axbz-051 大鼠肝细胞 BRL大鼠Buffalo 规格25毫升/株.
xy-axbz-052 小鼠成纤维细胞 3T3 规格25毫升/株.
xy-axbz-053 小鼠Mo-MuLv感染的3T3细胞 Mo-MuLV/3T3 规格25毫升/株.
xy-axbz-054 小鼠成纤维细胞 3T3NIH 规格25毫升/株.
xy-axbz-055 逆转录病毒包装的NIH3T3细胞 PA317 规格25毫升/株.
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文献和实验相关实验
LacZ Cell Staining and β-galactosidase Embryo Staining
完整的实验方法请点击下面的链接下载： 11 LacZ Cell Staining and β-galactosidase Embryo Staining.pdf
Methodologies for Staining and Visualisation of β-Galactosidase in Mouse Embryos and Tissues
, localization of β-galactosidase can be visualized throughout development and in adult tissues. β-Galactosidase staining may be used purely as a marker of gene expression and also as a tracer in cell lineage studies.
Chemiluminescent Detection of Senescence-Associated Galactosidase
Identifying molecules that serve as markers for cell aging is a goal that has been pursued by several groups. Senescence-associated β galactosidase (SA-βgal) staining is broadly used and very easily detected. β-gal is a lysosomal enzyme
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