Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒产品描述
细胞衰老(Cell senescence)是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制衰老(Replicativesenescence,RS),指正常细胞经过有限次数的分裂后,停止分裂,此时细胞虽然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括:1)不可逆的生长停滞;2)与衰老相关的β-半乳糖苷酶(senescence associated
β-galactosidase, SA
β-gal)的活化。作为溶酶体内的水解酶,通常在pH 4.0的条件下表现活性,但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性,且随着传代次数的增加,细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。
本试剂盒正是基于活性变化的生物学特征而设计的,专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测的一种技术。本试剂盒以X-Gal为底物,通过细胞内SA
β-gal在酸性条件下稳定表达,催化底物生成深蓝色产物,从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。
本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定,参数经优化,着色敏感,特异性高。仅对衰老细胞进行染色,不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
产品组分
组分编号 |
组分名称 |
规格 |
保存 |
40754-A |
A(Washing Buffer A) |
100 ml |
4ºC或-20℃保存 |
40754-B |
B(Fixative Solution B) |
100 ml |
-20℃保存 |
40754-C |
X-Gal溶液C(X-Gal Solution C) |
5 ml |
-20℃避光保存 |
40754-D |
染色液D(Staining Solution D) |
1 ml |
-20℃保存 |
40754-E |
染色液E(Staining Solution E) |
1 ml |
-20℃保存 |
40754-F |
染色液F(Staining Solution F) |
100 ml |
-20℃保存 |
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存,一年有效,其中X-Gal溶液需避光保存。
注意事项
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 本试剂盒固定液B存在一定的腐蚀性和毒性,操作时请注意小心防护。
- 染色液E刚刚溶解后会观察到有沉淀,属正常现象,充分混匀或者漩涡震荡可促使沉淀全部溶解,之后用于染色实验。
- X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的细胞样品可以在 4ºC冰箱保存,但也需避免光照。
- 细胞β-半乳糖苷酶活性强,孵育3 h即显示阳性;细胞β-半乳糖苷酶活性弱,则需要孵育24 h。细胞染色最长孵育时间为 24 h。细胞呈现蓝色的部位即为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性部位。
- 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值,不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。
- 本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35 mm 培养皿和各种孔数的细胞培养板,只需按照一定的比例调整工作液用量即可(参考表2)。
使用方法
- 实验前的准备工作:
- 染色工作液配制
实验开始前,将试剂盒内各组分从冰箱内取出,置于室温回温15~20min。其中X-Gal溶液C最好置入冰槽里等待溶化。根据以下染色工作液配方表(表1),实验体系类型,检测样本数,统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后,置入37ºC恒温水槽里预热,即为
染色工作液。
表1 染色工作液配方表
染色液D |
10μl |
染色液E |
10μl |
染色液F |
930μl |
X-Gal溶液C |
50μl |
Cell Senescence β-Galactosidase Staining Kit细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒注意:配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器,对于二者的判定:聚丙烯容器可高压灭菌,而聚苯乙烯容器则不可高压灭菌,一旦高温高压处理就会严重变形。
但是染色过程可以在聚苯乙烯容器内进行,如细胞培养常用的6孔板。
2)不同体系染色工作液用量
本试剂盒适合各种类型和规格的培养细胞:载玻片,载玻片培养皿,35 mm 培养皿,和各种孔数的细胞培养板,可参考下表2调整染色工作液用量:
细胞培养类型 |
建议处理液 用量 |
载玻片(组织切片) |
1 ml |
载玻片培养皿 |
1 ml |
35 mm 培养皿 |
1 ml |
96 孔培养板 |
0.1 ml |
48 孔培养板 |
0.2 ml |
24 孔培养板 |
0.25 ml |
12 孔培养板 |
0.5 ml |
6 孔培养板 |
1.0 ml |
- m2培养瓶
|
3.0 ml |
注意:以上用量仅作为参考,对于染色工作液的实际用量以充分覆盖住细胞和组织为准。根据以上用量,本试剂盒对于6孔板,足够做100个样本的检测;对于24孔板,足够做400个样本的检测;对于96孔板,足够做1000个样本的检测。对于组织切片足够做100个样本检测。但是组织切片的厚度,大小对染色液用量的要求明显不同,必须做合理用量调整。
- 6孔细胞培养板染色(贴壁细胞):
- 吸除细胞培养液,用1ml清洗液A洗涤1次,加入1ml 固定液B,覆盖整个生长表面。室温固定15min。
注意:对于其他类型的培养板,固定液用量参照此比例进行操作。
- 吸除固定液B,用1ml清洗液A洗涤细胞3次,每次3min。
- 吸除清洗液A,每孔加入1ml预热的染色工作液,覆盖整个生长表面。
- 37℃孵育3 h~16 h,或直到细胞呈现蓝色,可以用封口膜或保鲜膜封住6孔板防止液体蒸发。
注意:37℃孵育不能在CO
2培养箱中进行,因其内高浓度的CO
2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。
5) 普通光学显微镜下观察和计数:表达SA
β-gal的细胞为阳性细胞,呈现蓝色。如不能及时观察计数,可以去除染色工作液,加入2ml
清洗液A或PBS缓冲液,4℃可以保存数天,或者加入封片剂封片后,4℃可保存较长时间。
- 悬浮细胞染色:
- 离心收集细胞至1.5ml离心管内,用1ml清洗液A洗涤1次,加入1ml 固定液B,覆盖整个生长表面。室温固定15min。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。