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HisSep Ni-NTA Agarose Resin
大量现货
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
10ml/50ml
规格: | 10ml | 产品价格: | ¥498.0 |
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规格: | 50ml | 产品价格: | ¥2098.0 |
HisSep Ni-NTA Agarose Resin以交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,与Ni-IDA树脂相比,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室纯化His标签蛋白不可或缺的树脂之一。
产品性质
基质(Matrix) | 交联的6%琼脂糖凝胶 |
粒径(Bead size) | 45-165 µm |
载量(Capacity) | >40 mg 6×His-tagged protein/mL基质 |
耐压(Tolerance Pressuremax) | 0.1 MPa, 1 bar |
储存缓冲液(Buffer) | 含20%乙醇的1×PBS |
缓冲液名称 | 配方 | 配制1L溶液所需各种试剂量 |
Lysis Buffer (pH8.0) | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 10 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 0.68 g |
Wash Buffer (pH8.0) | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 20 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 1.36 g |
Elution Buffer(pH8.0) | 50 mM NaH2PO4 300 mM NaCl 250 mM imidazole NaOH调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
NaH2PO4 ·2H2O 7.8 g NaCl 17.54 g Imidazole 17.0 g |
缓冲液名称 | 配方 | 配制1L溶液所需各种试剂量 |
Lysis Buffer (pH8.0) | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至8.0, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
Urea 480.5 g NaH2PO4 ·2H2O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g |
Wash Buffer (pH6.3) | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至6.3, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
Urea 480.5 g NaH2PO4 ·2H2O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g |
Elution Buffer(pH4.5) | 8 M Urea 100 mM NaH2PO4 100 mM Tris·HCl 盐酸溶液调pH至4.5, 0.22 µm或0.45 µm过滤除菌 |
Urea 480.5 g NaH2PO4 ·2H2O 15.6 g Tris·HCl 15.76 g |
试剂种类 | 浓度 |
还原剂 | 5 mM DTE 0.5-1 mM DTT 20 mM β-mercaptoethanol 5 mM TCEP 10 mM reduced glutathione |
变性剂 | 8 M urea 6 M Gua-HCl |
去污剂 | 2% TritonTM X-100(nonionic) 2% TweenTM20(nonionic) 2% NP-40(nonionic) 2% Cholate (anionic) 1% CHAPS (zwitterionic) |
其他类 | 500 mM imidazole 20% ethanol 50% glycerol 100 mM Na2SO4 1.5 M NaCl 1 mM EDTA 60 mM citrate |
缓冲液 | 50 mM sodium phosphate, pH7.4 100 mM Tris-HCl, pH7.4 100 mM Tris-acetate, pH7.4 100 mM HEPES, pH7.4 100 mM MOPS, pH7.4 100 mM sodium acetate, pH7.4 |
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
柱子反压过高 | 填料被堵塞 | 裂解液中可能含微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22 µm或0.45 µm)过滤,或离心去除。 |
样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5 µg/mL),Mg2+(终浓度1 mM),冰上孵育10-15 min | ||
样品太黏稠 | 有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。 | |
洗脱组分中无目的蛋白 | 蛋白可能是包涵体 | 可通过电泳检测裂解液,分析上清中是否有目的蛋白,包涵体蛋白需按照包涵体蛋白的纯化方式 |
表达量太低 | 优化表达条件,使用包涵体纯化缓冲体系 | |
目的蛋白结合比较弱,在洗杂步骤中已被洗下来 | 提高Wash Buffer的pH值,或者降低咪唑浓度 | |
目的蛋白结合过强,不容易洗脱下来 | 降低Elution Buffer 的pH,或者增加Elution Buffer中的咪唑浓度 | |
使用10-100 mM EDTA溶液剥离镍离子,同时得到蛋白 | ||
蛋白降解 | 菌体破碎时需添加一些蛋白酶抑制剂 | |
在4℃下进行纯化操作 | ||
洗脱组分不纯(含多种蛋白) | 洗杂不彻底 | 增加Wash Buffer 体积 |
样品中含有其他His标签蛋白 | 通过调节pH值或咪唑浓度来优化洗杂条件。再使用其他纯化手段(如去离子交换,疏水等)进一步纯化洗脱组分。 | |
填料颜色变浅或变成白色 | 镍离子脱落或者剥离 | 按照填料再生的操作重新挂镍离子 |
填料呈现褐色 | 缓冲液中含有DTT等还原剂 | 参考附3适当降低还原剂DTT的浓度,或改用巯基乙醇 |
上样过程中蛋白发生沉淀 | 操作温度太低 | 室温下进行上样 |
蛋白发生聚集 | 在样品和所有缓冲液中添加稳定剂,如0.1%Triton X-100或Tween-20 |
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