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上海科渊生物技术有限公司
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文献和实验1.目的 学会CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞。 2.原理 细菌在0℃ CaCl2低渗溶液中胀成球形,丢失部分膜蛋白,成为容易吸收外源DNA的状态。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,50ml 微量离心管,1.5ml 微量离心管,双面微量离心管架,台式冷冻离心机,制冰机,恒温摇床,分光光度计,超净工作台,恒温培养箱,摇菌试管,三角烧瓶,接种环。 4.试剂 E. coli XL1-Blue,LB培养基,0.1 mol/L CaCl2溶液,无菌ddH2O 5.实验
1.目的 了解外源基因在原核细胞中表达的特点和方法。 2.原理 外源基因克隆在含有lac启动子的表达系统中。先让宿主菌生长,lac I产生的阻遏蛋白与lac操纵基因结合抑制下游的外源基因转录。向培养基中加入诱导物IPTG(异丙基硫代-b-D-半乳糖),解除抑制使外源基因大量表达。表达的蛋白可经SDS-PAGE或Western-blotting检测。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,50ml 微量离心管,1.5ml 微量离心管,双面微量离心管架,台式
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器 吸头,50ml 微量离心管,1.5ml 微量离心管,双面微量离心管架,台式冷冻离心机,制冰机,恒温摇床,分光光度计,超净工作台,恒温培养箱,摇菌试管,三角烧瓶,接种环。 4.试剂 LB培养基(加抗菌素),100mg/ml IPTG,20%葡萄糖。 5.实验准备 无菌ddH2O,1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器 吸头装入相应的吸头盒(灭菌),牙签(灭菌),摇菌管(灭菌),100mg/ml IPTG










