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文献和实验μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer ( 10 μM 1-5 μL 下游 Primer ( 10 μM ) 1-5 μL 模板 lamid DNA ~ 50 ng genomic DNA ~ 1000 ng cDNA ~ 500 ng 粗提液 ~ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例: 一、plasmid DNA 扩增 1.提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100,250,500
2 1.2ml Trizol, lane3 1.5ml Trizol,lane4 2mlTrizol 以上用0.2倍体积氯仿,只用Trizol抽提一次 lane5 1ml Trizol,0.35体积氯仿,抽提一次 lane6 1ml Trizol, 0.35体积氯仿,抽提两次 lane7 1ml Trizol, 0.20体积氯仿,抽提两次 lane8 2ml Trizol,等体积氯仿 其中lane5为常规提取方法。 如果1-5有杂带,,67没有,说明是脑组织本身蛋白量和hnRNA过多
Single tube confirmation PCR protocol
concentration of ~10 µM). We use 5 µl of each primer in 50 µl PCR reactions (~ 1 µM final primer concentration). - Label 20 thin-wall PCR tubes (5 for each isolate) and add the following primer pairs: A-B, A-kanB, C-D, kanC-D, and A-D. Tubes 1-5
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