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文献和实验提取样品的总RNA后,一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构,因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳,得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。一、试剂:DEPC(Sigma公司产品),MOPs(Bocherigmer公司产品),甲酰胺(Formamide,Sigma公司产品),溴酚蓝(Bromphenol Blue,Sigma公司产品)。EDTA-Na2,氢氧化钠,醋酸钠,甲醛,甘油,分析纯,国产。二、试剂配制:1、DEPC 水的处理:用量筒量取去离子水2L
量成正比。 判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的电泳图谱 应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带,且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。 三、材料、试剂及器具 1、 材料 总RNA提取 物。 2、 试剂 (1)0.1%DEPC水:200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀,室温放置过夜,高压灭菌。 (2)10x电泳
Buffer, Sephadex G-50,SDS,双氧水, 灭菌水等。 5. 方法与步骤 5.1 用具的准备: 180度烤器皿:三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。 电泳槽:清洗梳子和电泳槽,并用双氧水浸泡过夜,用DEPC水冲洗,干燥备用。 处理DEPC水(2 L)备用。 5.2 用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染。 用RNAZap擦洗梳子,电泳槽,刀片等,然后用DEPC水冲洗二次,去除RNAZap
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