转录因子HELT蛋白抗体

干货 | 蛋白质-DNA 互作研究那些你不知道的技术更迭!

原理： 将染色质和与之相互作用的转录因子和组蛋白通过甲醛等物质交联起来，然后通过超声将染色质打碎成小片段，加入针对特定转录因子或特殊修饰的组蛋白抗体，通过 Protein A/Protein G 微球或磁珠将抗体-转录因子-染色质复合物拖下来，通过 PCR 或测序的方法检测与目的蛋白相结合的 DNA 序列，进而研究这些转录因子在细胞发育或者生长中的作用位点。 ✦ ChIP-seq： ChIP-seq 将 ChIP 技术与二代测序相结合，将 ChIP 下来的 DNA 进行二代测序文库构建，能够获取

ChIP 实验面面观，博士师兄吐血总结推荐

是目前公认的研究此相互作用的最佳选择，是真核生物基因表达机制研究中不可或缺的核心技术之一。它的基本原理是在活细胞状态下，固定蛋白质-DNA（染色质）复合物，并将其切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法（抗体亲和）沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的 DNA 片段，通过对目的片段的纯化与后期检测，从而获得蛋白质与 DNA 相互作用的信息。ChIP 不仅可以检测体内多种转录因子与 DNA 的动态作用，还可用来研究组蛋白的各种共价修饰（如磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等）与不同状态

学会这些，你就是 ChIP 专家

之外，在做组蛋白修饰 ChIP 时，因为各种组蛋白修饰之间差异非常小，这对抗体特异性提出了更高的要求。如果抗体特异性不够高导致发生交叉反应，很可能产生假阳性或假阴性结果。针对这一问题，可以使用包括 384 种不同修饰的组蛋白芯片检测自己生产组蛋白抗体特异性，保证组蛋白抗体的高特异性。 没有特异性抗体怎么办？ 如果目标蛋白没有商业化的抗体可选，一种方式是定制抗体，之后进行 ChIP 验证。这种方式的优点是检测到的是内源性的蛋白，结果反映的一定是体内真实的蛋白和 DNA 相互