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- 2025年07月15日
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文献和实验手把手教你利用 CRISPR-Cas9 系统精准敲除靶标基因
反向引物：AAAC-(N)20RC2. 引物磷酸化与退火反应在 PCR 仪中进行。.37 ℃, 30 min95 ℃, 5 minPCR 梯度降温到 25℃ ，速速为每秒降低 0.1℃25 ℃, 5 min4 ℃, 5 min放置在冰上或者保存在负 20℃ 冰箱备用。注意：退火这一步如果 PCR 不是梯度 PCR 仪，37 度磷酸化反应后，加热到 95 度变性后取出到室温，让它慢慢降到室温，以保证退火效果。3. Px458M(或 PX459M) 和 EZ-Guide-XH 载体的 BbsI 酶消化
memoday 最近在做一个信号通路的下游磷酸化水平检测，但是做western没有看到任何条带,包括p-ERK,p85。麻烦各位战友帮我分析一下可能原因吧： 1.293T细胞转染质粒（带外源基因），24h 2.无血清培养18h 3.配体（外源基因是该配体的膜受体）激活，37度，10min 4.PLB（promega公司）裂解细胞，做western，抗体是SANTA CRUZ公司的p-ERK (Tyr 204)，以及cell
25‐cm2 tissue culture dishes 37°C, 5% CO 2 incubator 6‐well culture plates (Nunc, Thermo Fisher
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