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低温冷藏
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现货
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上海善然生物科技有限公司
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5mg
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文献和实验Pst I 0101/0101 1 1 0102/0102 1 0 0103/0103
的方法是:用平末端克隆法将片段插入已去磷酸化的载体上,(或使用NEB平端克隆试剂盒 #E0103)。插入片段的5"末端应磷酸化,除非在引物合成时,引物的5"末端已有磷酸基。 PCR产物是否能在PCR反应体系中直接磷酸化? 不能,因为PCR反应中的硫酸胺会抑制T4多聚核苷酸激酶活性。可采用胶回收或G25离心柱法来纯化DNA。在50 μl反应体系,加入1×T4 Polynucleotide Kinase Buffer、1 mM ATP 和 小于200 pmol的5"羟基末端
耐热DNA聚合酶常见问题(Thermpholic Polymerases FAQ)
聚合酶(如VentR、Deep VentR和9oNm)产生95%的平末端。与Taq DNA聚合酶相似,不具有校读功能的DNA聚合酶,如VentR(exo-)和Deep VentR(exo-)产生两种末端,其中70%是平末端,30%是3'末端单个碱基突出的粘性末端。 我想克隆PCR产物,这个PCR产物是用VentR 或Deep VentR DNA聚合酶合成的,选用哪种克隆方法更好? 最好的方法是:用平末端克隆法将片段插入已去磷酸化的载体上,(或使用NEB平端克隆试剂盒 #E0103
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