Chip检测

Chip检测

Chip检测实验操作流程：
1 、样品准备与交联
细胞收集后，用37%的formaldehyde处理细胞，交联核酸与DNA结合蛋白；
2. 超声打断染色质
裂解细胞，用Bioruptor将染色质超声破碎成200－1000bp片断；将片段分为两份，一份用于免疫共沉淀，一份用于对照。
3 、免疫共沉淀 (IP)
取B步骤所得一份片断与ChIP特异抗体结合进行免疫共沉淀，利用免疫磁珠法富集抗体复合物。
4 、解交联及纯化 DNA
将富集的DNA/蛋白复合物解交联释放DNA片段，并进行纯化（IP DNA）；B步骤所得用于对照（Input DNA）的片断作不进行IP实验，但也要解交联并纯化。
5 、 DNA 段 PCR 扩增
针对ChIP DNA, Input DNA及对照DNA的目的片段设计特异性引物并进行荧光定量PCR扩增。
6 、结果分析