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- 2025年12月31日
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- 服务名称：
分子生物学技术服务
- 提供商：
伊莱博生物科技（上海）有限公司
siRNA合成
siRNA合成：特点
→ 技术平台：化学合成；HPLC纯化
→ 可进行科学周到的序列设计服务，产品经过严格测试，确保质量的高度稳定
→ siRNA oligo均由HPLC纯化，
→ 多种选择：普通siRNA，化学修饰，荧光标记，Stealth RNAi
→ 化学合成的siRNA具有操作简便、转染效率高、对细胞的或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点，特别适用于基因靶位点不确定情况下，进行siRNA有效片段的筛选。
siRNA合成：原理
在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex, RISC)。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3'端12个碱基的位置切割mRNA。
siRNA合成：服务流程
1) 根据序列信息，进行化学合成；
2) HPLC纯化；经过分光光度计精确定量
3) 冻干处理
实验服务:
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
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文献和实验在较早的哺乳动物 RNAi 实验中， siRNAs 是通过化学方法合成的，就像合成引物一样， 是应用起来最方便的一种方法，研究人员几乎不需要做什么工作。但是RNA合成成本高，定制周期长，特别是有特殊需求的RNA序列。由于价格比其他方法高出很多， 而且设计好的 siRNAs 中通常只有大约 25% 的 siRNAs 能高效抑制基因的表达（抑制效率 >80% ）， 一个基因通常合成 3—5 对 siRNAs ， 这使得化学合成 siRNA 的成本更高 （就是 6 — 10 条
化学合成的siRNA 与生物合成siRNA 相比，有以下优点：►操作简便，研究人员得到合成好的siRNA 后，进行简单的稀释处理即可实验。►转染效率高，相对于分子量较大的DNA 质粒，其转染效率高。►对细胞的或者组织的毒副作用小。►可大规模制备，本公司的合成规模可达到克级 (一次合成量1 - 100 g)。►特别适用于基因靶位点已确定，需要大量siRNA 进行siRNA 动物实验研究。
mRNA 区域设计 siRNA。 2.选择 GC 含量低的 siRNA 研究人员发现 G/ C 含量 40–55％ 的 siRNA 活性比 G/ C 含量高于 55％ 的高。 3.纯化体外转录的 siRNA 确保所有用于转染的 siRNA 大小和纯度。为了实现最高级别的纯度，我们建议使用玻璃纤维过滤器结合和洗脱，或用凝胶纯化。所用的凝胶为 15- 20％ 的丙烯酰胺凝胶，以除去反应体系中多余的核苷酸、短低聚物、蛋白质和盐。注意：化学合成的 RNA 通常需要通过凝胶电泳进行纯化。 4.谨防RNA
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