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文献和实验首先给大家介绍的是 Cas9 质粒构建的第一个拦路虎,如何寻找目的基因的 CDS 序列。1. 在 NCBI 的 Gene 数据库中输入目的基因名称(以 p53 为例)2. 找到对应种属的目的基因,这里选择人源的话是第二个、点击(方框内)3. 进入后找到 Genebank 选项、点击(往下拉慢慢看)4. 进入后找到 CDS 区中的 CCDS(方框中),点击5. 找到对应的 CDS 区6. 将红色以及蓝色的部分间隔的输入麻省理工设计 gRNA 评分网址后根据评分选择分数较高的 3-5 对 gRNA 即可
三句话读懂一篇 CNS:让人产生幻觉的毒蘑菇,竟能治疗抑郁症?韩春雨开发 RNA 高效追踪平台
」同时鉴定出了超过 105 个新型 RNA 病毒! 图 1:来源 Nature 2. Nucleic Acid Research:韩春雨团队开发基于 Cas6 的 RNA 荧光追踪系统 追踪 RNA 在活细胞中分布的技术可极大推动其研究。 2022 年 1 月 21 日,河北科技大学韩春雨团队在 Nucleic Acids Research 杂志上发表研究论文 A Cas6-based RNA tracking platform functioning in a fluorescence
【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol
这些方面的进展。关于这些技术的具体原理和操作细节,请查看我之前的帖子附件详细介绍。不清楚的请联系我咨询。此贴主要谈一谈在用这些技术进行癌细胞株阳性细胞克隆筛选的过程中,如何进行阳性克隆筛选,为初次接触这些新技术的研究者提供一些参考意见。一般CRISPER-Cas9质粒转染后,采用有限稀释法接种到96孔板中长克隆,待到单个细胞长到几百到1000个细胞左右时,显微镜下仔细观察每一个孔的细胞,若发现非单克隆的细胞需要将其标注出来剔除筛选之外。传两代后,取出单个克隆的一部分细胞提取基因组DNA。分析敲除位点
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