BaiO 醛基基片探针固定增效剂

基因芯片实验原理与方法（一）

。以下分别介绍这两类芯片的基本原理和特点：寡核苷酸芯片(Oligonucleotides Chip)概念：是指做在固相载体上的寡核苷酸微阵列。其制备方法以直接在基片上进行原位合成为主、有时也可以预先合成，再按照制备cDNA芯片的方法固定在基片上。原位合成(In situ synthesis)是目前制造高密度寡核苷酸芯片最为成功的方法，有几种不同的工艺，其中最著名的是美国Affymetrix公司。Affymetrix公司已公开的光引导化学合成主要过程如下：首先根据杂交目的确定寡核昔酸探针的长度和序列

直接点样的芯片制备技术

将凝胶激活从而与蛋白质形成连接；对于糖蛋白，则可用酰肼代替酰胺将凝胶激活后与蛋白质上的多糖基团结合，达到固定蛋白质的目的。通常情况下，点样后处理包括水合、紫外交联、洗脱和封闭4个步骤。水合的目的是保证样品与基片表面在溶液状态下充分反应；紫外交联的目的则是希望样品与基片表面形成的化学键能够吸收紫外线而变得更加牢固；洗脱的目的是为了洗掉那些没有牢固结合的样品，以消除其在杂交过程中的影响；封闭则是为了消除基片表面活性基团与杂交液中的探针分子之间的非专一性相互作用而产生背景。 封闭剂的选择与封闭

核酸膜免疫---第三部分：共价连接及生产

化学试剂活性愈高，失活率愈大。为克服这个问题，制造商现在采用对目标探针特异性反应的低活性化学基团。醛基和胺基间的反应就是个典型例子，其中胺基和醛基的功能性都比较稳定。另一个问题是非特异性结合。活化膜在应用前必须进行封闭，否则会有额外的样品附着在膜上。封闭步骤需简单、快速、高效。理想的封闭结果是形成一个疏水、无电荷的膜表面，然而通常情况下这很难做到。靶物质和膜结合后也必须进行封闭。膜表面钝化将引入一个新的化学反应，虽然这些新的化学反应不和核酸分子作用，但它可增加膜表面的电荷及疏水性进而导致非特异