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- 2025年07月14日
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100
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上海远慕生物科技
- 规格：
250g
货号：YM-BG01254
保质期： 24个月
供应CDC厌氧菌琼脂【培养基配制】
先计算所需培养基之份量 (体积)，依已商品化培养基产品上之指示称取所需克数，并加入蒸馏水。
1）搅拌均匀后，于微波炉中加热数分钟将所有成份溶解后
2）利用分注器进行分装(切勿锁紧盖子！)。接著放入杀菌釜中进行灭菌工作
3）若是配制slant 则需于灭完菌后趁 培养基未凝固前锁上盖子并斜放 (可用厚书辅助)；若是配置broth或deep agar 可等其冷却后再锁紧盖子，并放入4℃冰箱中保存备用。
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供应CDC厌氧菌琼脂【培养基种类与基本成分】
1）氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
2）碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
3）培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠、钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素，细胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。
4）大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但是，细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7)，而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲，因此，气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或空气中CO2浓度设定在5%，培养液中NaHCO3的加入量为1.97g/L；如果CO2浓度维持在10%，培养液中NaHCO3的加入量为3.95g/L。细胞培养瓶盖不应拧得太紧，以保证气体交换。 HEPES 是一种非离子缓冲液，在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力，但是非常昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒.HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。
5）在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源，但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。
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文献和实验剂与生长刺激因子（血清、维生素K、氯化血红素、聚山梨酯-80等）。 （2）培养基的选择：初次培养一般都使用选择培养基和非选择培养基。 1）非选择培养基：本培养基使分离的厌氧菌不被抑制，几乎能培养出所有的厌氧菌。常使用心脑浸液琼脂（BHI）、布氏琼脂（BR）、胰豆胨肝粉琼脂（GAM）、胰胨酵母琼脂（EG）、CDC厌氧血琼脂等。 2）选择培养基：为有目的选择常见厌氧菌株，以便尽快确定厌氧的种类。 2.每份标本至少接种3个血平板，分别置于有氧，无氧及5%～10à2环境中培养
下 12000rpm 离心 15 min。收集蛋白上清，取少许裂解液用于后续检测各蛋白表达情况。剩余的裂解液加入 Anti-Cdc37，4℃ 缓慢摇晃孵育过夜。用适量裂解缓冲液预处理 ProteinA+G，20uL/管加入各抗体孵育过夜的细胞裂解液中，4℃ 缓慢摇晃孵育 2~4 h。免疫沉淀反应后，4℃，3000rpm，3 min，小心吸取上清，琼脂糖珠用 1 mL 裂解液冲洗 3-4 次，最后加入 15uL 2*SDS 上样缓冲液，100℃，5 min。Laemmli-SDS-PAGE电泳：电泳时根据情况
比菌体宽大，似鼓槌状，是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性，带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌，最适生长温度为37℃pH7.0～7.5，营养要求不高，在普通琼脂平板上培养24～48小时后，可形成直径1mm 以上不规则的菌落，中心紧密，周边疏松，似羽毛状菌落，易在培养基表面迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环，在疱肉培养基中培养，肉汤浑浊，肉渣部分被消化，微变黑，产生气体，生成甲基硫醇（有腐败臭味）及硫化氢。一般不发酵糖类，能液化明胶，产生硫化氢，形成吲哚，不能还原硝酸
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