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- 纽龙生物
- 杭州
- NRPB06L、NRPB06S
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
20%乙醇，2~8℃保存
- 保质期：
5年
- 英文名：
Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow，rat-PA
- 供应商：
杭州纽龙生物科技有限公司
- 规格：
1ml
| 品 名 | 耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF |
| 英文名 | Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF |
| 目录号 | NRPB06L、NRPB06S(预装柱) |
| 规 格 | 20 ml，100 ml，1 L，1 ml预装柱，5 ml预装柱，10 ml预装柱，特殊规格订制 |
| 运 输 | 2 ~ 25℃，常压、避光 |
| 贮 存 | 20%乙醇，2 ~ 8℃ |
| 保质期 | 3年 |
耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF与普通的蛋白A琼脂糖凝胶相比，主要提高了凝胶的耐碱性，可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除热源。在骨架与重组耐碱蛋白A键合上分别设计了延伸碳臂和定向结合位点，保证了重组耐碱蛋白A与骨架的定向牢固键合，以及与抗体的高效亲和。
技术指标：
| 基质 | 4%高度交联琼脂糖凝胶 |
| 配基 | 重组耐碱蛋白A |
| 配基密度 | ≥6 mg/ml |
| 填料粒径 | 60 ~ 180 μm |
| 最大流速 | 800 cm/h |
| 推荐流速 | 20 ~ 100 cm/h |
| 工作（清洗）pH值 | 3 ~ 11(2 ~ 13) |
| 耐反压 | 0.3 MPa |
| 载量 | ≥40 mg/ml IgG |
产品特点：
- 配基脱落：约1~7 ng rat-PA/mg IgG，配套的rat-PA试剂盒（NRPB53S）检测多次使用的洗脱液中残留rat-PA含量
- 耐碱性
0.1 M 处理72 h载量维持在90%以上；
0.5 M处理16 h在80%以上，处理36 h在50%以上；
1.0 M处理4 h在90%以上，处理8 h在50%以上。
- 耐酸性
pH 3.0、pH 2.0、0.1 M HCl (pH 1.0) 处理6天载量均维持在90%以上
0.5 M HCl处理2天载量在80%以上，处理6天在50%以上
- 耐压性
仪器：AKTA explorer 100
柱子：1.0 cm×30 cm
流速：每30 s增加0.5 ml/min
应用举例：
结合缓冲液：20 mM磷酸缓冲液，150 mM NaCl，pH 7.4
洗脱缓冲液：0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 4.0
中和缓冲液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
- 1 ml耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
- 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
- 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45 μm滤膜过滤上样；
- 用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
- 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其pH至中性；
- 每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M NaOH溶液再生清洗；
- SDS-PAGE（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
注意事项：
- 预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
- 样品洗脱后一般pH很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
- 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
- 使用后应进行在位清洗，一般建议用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
- 更高要求（消毒、去内毒素、超牢固蛋白残留等）的在位清洗，可以先用含还原剂（如100 mM DTT、β-ME或1-巯基甘油）的平衡缓冲液清洗3 ~ 5个柱体积，再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5个柱体积（10 ~ 30 min），然后用无菌无内毒素的平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
- 虽然本产品具有较好的碱耐受性，但长期使用较高的NaOH浓度（如0.5 mol/L）清洗仍会缩短使用寿命，建议每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次，每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次。
- 为了更好的保护填料，应避免强烈的pH变化，建议酸性洗脱目的抗体后，用平衡缓冲液恢复至中性，再进行NaOH清洗。
- 本产品具有极低的配基脱落率（＜10 ng/mg IgG），结合耐碱特性，特别适用于单克隆抗体的生产。但实验发现长期储存后首次使用配基脱落率会比较高，建议长期储存后的首次使用，先用酸性洗脱液清洗3 ~ 5个柱体积，再用平衡缓冲液平衡和样品纯化。
| 推荐流速 | |||
| 预装柱体积 | 1 ml | 5 ml | 10 ml |
| 流速(ml /min ) | 0.1 | 0.5 | 1 |
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文献和实验【原创】Protein A Sepharose 之进化篇。。。
[img][/img]Protein A 柱之进化 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。因而，将Protein A 与琼脂糖凝胶以一定的方式结合，可制备用于抗体纯化的亲和填料。 早期的Protein A柱结合的都是天然Protein A。天然Protein A由5个IgG结合域和其它未知功能的非Fc结合域组成，分子量约42KD，结构如图1所示。这种柱子对IgG的亲和能力很强，可以吸附大量的lgG。但同时，天然
各种多糖和糖蛋白，其原理是苯硼酸类似于凝集素可以和各种糖基上的邻二羟基发生亲和作用。5.膜蛋白分离有比较强的疏水性，可以用苯基或丁基琼脂糖凝胶FF 疏水色谱分离，如果是有糖基结构或者受体等，也可以用亲和色谱的方法。6.纯化抗体和抗原蛋白A 琼脂糖凝胶FF 可以用于分离纯化各种来源的抗体，包括抗血清、培养液以及腹水等样品。蛋白A 可以特异吸附IgG 的Fc 区，所以它也适合分离酶解后的Fc 片段，把Fab 片段和Fc 段分离。同时蛋白A 琼脂糖凝胶FF 也可用于血清中IgG 的分离，得到不含抗体的血清
可以纯化糖基化的蛋白，或者膜组分，甚至细胞等物质。此外硼酸琼脂糖凝胶FF也用来分离各种 多糖和糖蛋白，其原理是苯硼酸类似于凝集素可以和各种糖基上的邻二羟基发生亲和作用。 5. 膜蛋白分离 有比较强的疏水性，可以用苯基或丁基琼脂糖凝胶FF疏水色谱分离，如果是有糖基结构或者受体等，也可以用亲和色谱的方法。 6. 纯化抗体和抗原 蛋白A琼脂糖凝胶FF可以用于分离纯化各种来源的抗体，包括抗血清、培养液以及腹水等样品。蛋白A可以特异吸附IgG的Fc区，所以它也适合分离酶解后的Fc片段，把Fab片段
