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一般描述
氧钒核糖核苷复合物是核糖核苷酸之间形成的稳定复合物。它们是细胞核糖核酸酶(RNases)的低分子量抑制剂,可用于从细胞中分离RNA。
应用
核糖核苷钒络合物已用于以下情形:
作为裂解缓冲液的组分,用于Poly(U)下拉试验前的细胞系
在含m6A RNA片段的免疫沉淀反应(IP)前抑制核酸酶
作为杂交缓冲液组分,用于人类视网膜切片
氧钒核糖核苷复合物被用于在细胞裂解和mRNA纯化过程中作为核糖核酸酶抑制剂、用于在cDNA产生过程中保护mRNA并用于在使用DNaseI消化DNA的过程中保护RNA。
生化/生理作用
氧钒核糖核苷络合物(RVC)通过抑制核糖体亚基形成和抑制金黄色葡萄球 菌和大肠杆菌生长来引发抗菌功能。它也被用作组织的防腐剂。
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文献和实验酶抑制剂或20mmol/L氧钒核糖核苷复合物 (3)加0.5ml蛋白酶消化缓冲液,用刮棒混匀粘稠状裂解物并将其刮到平板的边缘。 蛋白酶消化缓冲液 0.2mol/L Tris-Cl(pH8.0) 25mmol/L EDTA(pH8.0) 0.3mol/L NaCl 2% SDS(4)用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物,再将其注入聚丙烯管内。重复3-4次,剪切DNA. (5)加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml,充分混匀后置于37℃温育30分钟。 蛋白酶K以贮存液的形式保存,贮存
【共享】RNA抽提实验注意事项,以及各种RNA的抽体的常用方法及步骤,还有质量鉴定的几种方法
7.6)重溶沉淀,加1ml乙醇,-70℃贮存备用。回收RNA时,只需取出1小份贮存液,加3mol乙酸钠(pH5.2 )至终浓度为0.3mol/L充分混匀,用微量离心机于4℃以12 000g离心5分钟即可。如需去除氧钒核糖核苷复合物,用含0.1%羟喹啉的苯酚[用0.01mol/L Tris.Cl(pH7.8)平衡]将RNA终溶液抽提数次即可。4. 对大多数细胞株来说, 一个直径90mm 培养甲中培养的RNA收率为100-200μg。用异硫氰酸胍和有机溶剂提取RNA 收集细胞,离心5000r/min
土),用于吸附并灭活RNA酶。尽管现仍有Macaloid出售NL Chemicals), 但氧钒核糖核苷复合物和RNA酶的蛋白质抑制剂更常用。下述程序的优点是速度快,并能同时处理很多样品。 一、细胞的裂解 单层细胞的裂解 悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解 a.单层细胞的裂解 a)吸出培养液,以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞,重复1次,将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上,再将铝板置于冰盘上。 b)直径为90
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