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文献和实验请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分？
各位老师： 您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
RT—PCR 反应更加快速、灵敏，操作简便，污染率低，RNA 二级结构减少，并且因为聚合酶有校正活性，从而降低了 PCR 反应的错配率。而在两步法中，反应的精确度高，人为的误差相对较小，并且由于在第一步中将 RNA 反转录为 cDNA，从而更易于保存。 另外，两步法的整个过程比一步法更节省费用。传统检测方法的样品用量一般在 ug 级，而在 RT—PCR 检测系统中样品用量陡降至 pg 级。这就在很大程度上降低了实验操作的难度，特别是 mRNA 样品制备的过程得以简化。 3. 应用 对基因
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。 2. 鼠尾直接PCR试剂盒（常温裂解）：一步法 PCR；处理鼠尾样本无需加热；用于高通量鉴定、筛选。 3. 通用植物直接PCR试剂盒：无需进行 DNA 纯化；高效特异性扩增样品；用于多种植物叶片的处理。 4.EDTA抗凝血直接PCR试剂盒：无需预处理血液；世界上血液耐受能力最强的 PCR 反应体系；安全可靠。 5.植物总RNA提取试剂盒：整套试剂盒RNase-Free；RNA得率高；质量高；安全快速。 有奖免费试用： RIPA裂解液(中) 火晶梯度PCR仪 康宁SORENSON
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