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Trizol(总 RNA 提取
inovogen
重庆英茂盛业生物科技有限公司
2-8℃保存
Trizol(总 RNA 提取试剂)用于从组织和细胞中分离总 RNA。其适用范围广,操作简单快速。利用其提取的总 RNA 完整性好、 纯度高, 最大限度去除 DNA 和蛋白污染,后续可直接用于 RT-PCR、Northern Blot、mRNA 纯化以及体外翻译等实验。保存:2-8℃避光密封保存 12 个月。
使用说明需自备氯仿,异丙醇或无水乙醇,75%乙醇(RNase-free H 2 O 配制)和 RNase-free H 2 O。
1、样本裂解组织样本:(1)将 50-100 mg 动物或植物组织切成小块,放入普通玻璃匀浆器内,加入 1 ml Trizol,匀浆。注:裂解产物应呈澄清的透明粘稠液体。对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品如肌肉、脂肪组织和植物结节部位等,匀浆后仍存留有不溶物质,应先 4℃ 12,000xg 离心 10 min,取上清至新的离心管中。细胞样本:(1)贴壁细胞:去除培养液,每 10 cm 2 培养面积(6 孔板单孔或 35 mm 平皿)加入 1 ml Trizol,用加样器吹打数次,以确保细胞完全裂解,然后转移至离心管中。注:Trizol 的使用量应由培养皿表面积决定,而非由细胞数目决定。Trizol 量不足可能导致提取的 RNA 中有 DNA 污染。(2)悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每 5-10×10 6 动植物或酵母细胞,或每 1×10 7 细菌细胞加入 1mlTrizol, 用加样器吹打,使其完全裂解,然后转移至离心管中。2、1ml Trizol 裂解产物于室温放置 5 min。(此时样品可在-80℃长期保存)3、每 1 ml Trizol 加入 200ul 氯仿,剧烈振荡 15 s,室温放置 2-3 min。4、4℃ 12,000 xg 离心 15 min,样品分成三层:红色的下层有机相,中间层和无色的上层水相。5、吸取含总 RNA 的上层水相(约 500ul)至一新的离心管中,注意不要碰到中间层或下层有机相。6、加入吸取水相等体积的异丙醇或双倍体积的无水乙醇,颠倒混匀。7、4℃ 12,000 xg 离心 10 min,弃除上清。8、加入 1 ml 75%乙醇,颠倒混匀,4℃ 12,000 xg 离心 5 min,弃除上清。9、4℃ 12,000 xg 空离 2 min,吸去残留液体。10、室温放置 5-10 min 晾干,加入适量 RNase-free H 2 O 溶解 RNA。
注意事项1、本产品含有苯酚等物质,实验时请穿戴实验服并一次性手套和口罩。2、所有离心管,枪头及相关溶液都必须无 RNA 酶污染。3、本产品仅作科研实验使用,不支持临床等研究。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
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