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DNase I

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    ● 转录反应后 DNA 模板的降解
    ● 除去 RNA 样品中污染的基因组 DNA
    ● DNase I 印迹分析法
    ● 切刻翻译


    概述
    DNase I (RNase-Free)是一种非特异性核酸内切酶,切割DNA产生具有3´羟基和5´磷酸末端的二、三和寡核苷酸产物(1,2)。DNase I 可作用于单链、双链-DNA、染色质和RNA:DNA杂交体。


    来源
    重组 E. coli 菌珠,含有牛胰腺 DNase I 的 MBP融合克隆。


    反应条件
    1X DNase I 反应缓冲液, [10 mM Tris-HCl (pH 7.6 @25°C), 2.5 mM MgCl2 , 0.5 mM CaCl2 ]。37°C温育。


    单位定义
    1单位指在50 μl DNase I 反应缓冲液中,37°C 10分钟条件下,完全降解1 μg pBR322 DNA所需要的酶量。
    完全降解是指绝大多数的DNA片段减少成为四核苷酸或更短。


    浓度
    2,000 units/ml。


    贮存条件
    10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 2 mM CaCl2 和50%甘油。-20°C储存。


    热失活
    75°C 10分钟。


    注意事项
    应添加终浓度为5 mM的EDTA,以避免RNA在酶失活过程中被降解(3) 。


    参考文献
    (1) Kunitz, M. (1950) J. Gen. Physiol ., 33, 349–362.
    (2) Vanecko, S. and Laskowski, M. (1961) J. Biol. Chem ., 236, 3312–3316.
    (3) Huang, Z. (1996) Biotechniques , 20, 1012–1020.


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    • FOOTPRINTING WITH DNASE1

      assay)   0.5μl H2O 3)DNAse mix: made up near end of binding incubations. DNAse l(Worthington DPFF,Cat#LS0006330, lot #58A047,5mg) is 1mg/ml in150mM NaCl, 50% glycerol, store at ©20℃. Try 3 different [s] ofDNAse mix (A,B,C)   1,2 & 3μl stock DNAse1   

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      DNase I 足迹试验       蛋白质 结合在DNA片段上,能保护结合部位不被DNase破坏,DNA分子经酶切作用后遗留下该片段(亦称“足迹”),进而可以确定它的序列。在电泳凝胶的放射性自显影图片上,相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带。       DNase I足迹试验是一种鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上结合位点的方法,它不仅能找到与特异性DNA结合的目标蛋白,而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。足迹试验的方法较多,常用

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