Whatman3MM滤纸（20cm×20cm） Whatma

DNA点杂交

水稍微浸湿，并用20×SSC使其饱和。将膜放在经20×SSC预饱和过的滤纸（Whatman 3MM）上。4．以5μl的DNA分装样品在滤膜上点样，待前一个样品干燥后再点第二个样品。5．将滤膜放在一张干燥的滤纸（Whatman 3MM）上稍微晾干，以5×SSC漂洗5min。6．将DNA固定于膜上，硝酸纤维素膜需置80℃真空烤炉2h。当尼龙膜仍潮湿时，应用Saran包装膜（或任何类似的塑料薄膜）包裹，将DNA面朝下置紫外透射仪上，紫外线（280mn）照射3～5min，这时的滤膜已可用于杂交。

如何做好 Southern 杂交？

膜或尼龙膜并剪去一角作为标记，水浸湿后，浸入转移液中 5 min。剪一张比膜稍宽的长条 Whatman 3 mm 滤纸作为盐桥，再按凝胶的尺寸剪 3~5 张滤纸和大量的纸巾备用。按下图所示进行转移。（转移过程一般需要 8-24 hr，每隔数 hr 换掉已经湿掉的纸巾。转移液用 20× SSC。注意在膜与胶之间不能有气泡。整个操作过程中要防止膜上沾染其他污物。）4. 转移结束后取出 NC 膜，浸入 6× SSC 溶液数 min，洗去膜上沾染的凝胶颗粒，置于两张滤纸之间，80 °C 烘 2 hr

SDS-PAGE胶的干燥

 凝胶干燥时遇到的主要问题是凝胶的变形和破裂。将凝胶放在Whatman 3MM滤纸上可防止干燥凝胶变形，但凝胶是否破裂取决于凝胶的厚度和干燥器的质量，因此，应尽量使用薄胶并使凝胶干燥器处于良好状态，使其真空压力波动极少。 (1)试剂与配制：固定液：冰醋酸:甲醇:水（10:20:70） (2)电泳后的凝胶用5～10倍体积固定液在室温下固定，酸性固定液扩散后可使凝胶中的溴酚蓝变黄。蓝色全部消失后，继续固定5min。为防止凝胶破裂，在进行步骤(2)之前可将凝胶浸泡于含20%甲醇、30%甘油的溶液