柱式试管架

WB 样品粘稠像「鼻涕」怎么办？

脏蛋白提取得到蛋白质图谱[1]： 图 1：从小鼠脾脏和肝脏中使用不同方法提取总蛋白的蛋白图谱 条带 1 为柱式法提取的蛋白样品，条带 2 为 RIPA 可溶组分（RIPA 裂解后的上清），条带 3 为 RIPA 不可溶性组分（丢弃的沉淀部分）。实验发现 RIPA 的不可溶组分蛋白质图谱与可溶性组分图谱相似，但是不完全相同。 丢弃的不可溶组分中仍然可检测到许多蛋白条带，覆盖了整个蛋白质图谱分子量范围，不同样品的不可溶组分图谱也各不相同。丢失的蛋白会引起蛋白图谱发生变化，改变不同种类蛋白的比例，且具有

免疫荧光有结果 WB 却没条带？问题可能出在这一步…

，不同的裂解液配方溶解效率不同，通常使用的 NP-40、RIPA 等裂解液无法将所有蛋白全部溶出（如图 2），已经有研究发现细胞骨架、细胞外基质蛋白及部分膜蛋白、核蛋白等属于难溶蛋白，在提取过程中会形成不可溶沉淀[3]。如果目的蛋白属于这类难溶蛋白，仅使用可溶性组分（上清）用于 WB 实验时，目的蛋白将无法被检测到。针对这种情况，我们可以选择更加有效的裂解液配方，或者使用柱式蛋白提取法来增溶目的蛋白。例如，使用柱式法总蛋白提取法，可有效溶解难溶蛋白，避免不可溶组分的产生，有效解决蛋白丢失问题

如何做好 WB 方案设计？你需要了解这些信息

在 RIPA 不可溶组分中，如果样品又是研磨困难的组织样品，则优先选择对膜蛋白和小分子量蛋白提取效率更高且不需要匀浆仪的 Invent 柱式法工具进行总蛋白提取[1]。 * 目标蛋白在某个特定细胞器上（内质网，高尔基体，溶酶体，线粒体，内体等）表达，且蛋白表达量较低，若用总蛋白检测时条带较弱，则推荐使用 Invent 柱式法工具富集特定细胞器蛋白后再检测，提高检出效率。 * 研究蛋白定位或研究蛋白转运过程，推荐使用 Invent 柱式法工具进行细胞组分分离，将样品分离为不同组分如分成细胞核，细胞浆，细胞