- ￥5670
- AAT Bioquest
- 200T
- 12551
- 2025年08月03日
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- 详细信息
- 文献和实验
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Amplite® Colorimetric Beta-Lactamase Activity Assay Kit
- 保质期：
Amplite® Colorimetric Beta-Lactamase Activity Assay Kit
- 英文名：
Amplite® Colorimetric Beta-Lactamase Activity Assay Kit
- 库存：
比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒
- 供应商：
比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒
- CAS号：
12551
- 规格：
100次分析
货号：12551
Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-内酰胺酶活性检测的试剂盒，β-内酰胺酶是能够水解β-内酰胺的大家族酶。β-内酰胺环是所有β-内酰胺中的常见成分，包括青霉素衍生物，头孢菌素，单环内酰胺和碳青霉烯类。通过水解，β-内酰胺酶使β-内酰胺环打开，从而使分子的性能失活。临床和非临床环境中的通过合成β-内酰胺酶变得越来越对β-内酰胺产生抗性。为了克服这种抗性，β-内酰胺通常与β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸一起给予。因此，检测β-内酰胺酶活性对于评估β-内酰胺以及预防抗性至关重要。AAT Bioquest的比色β-内酰胺酶活性测定试剂盒提供灵敏的比色测定，用于测量生物样品中的β-内酰胺酶活性。使用Nitrocefin检测β-内酰胺酶活性，其在β-内酰胺酶水解后由黄色变为红色。可以使用吸光度酶标仪通过测量波长490nm至380nm的OD比来进行测定。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 490/380 nm |
| 推荐孔板: | 透明底板 |
96孔板实验示例
概述
准备β-内酰胺酶测定混合物（50μL）
加入β-内酰胺酶标准品或测试样品（50μL）
在室温下孵育30-60分钟
在OD比率为490 / 380nm时监测吸光度增加
注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。
操作方案
1.制备β-内酰胺酶标准储备液：
将100μLddH2O加入到β-内酰胺酶标准品（组分C）的小瓶中以制备50mU /mLβ-内酰胺酶标准储备溶液。
注意：未使用的β-内酰胺酶标准储备液应分成一次性等分试样并储存在-20oC。
2.准备β-内酰胺酶标准品的连续稀释液：
2.1将10μLβ-内酰胺酶标准储备液（50 mU / mL，步骤1）加入990 L 1×PBS缓冲液中，生成500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液。
注意：稀释的β-内酰胺酶标准溶液不稳定，应及时使用。
2.2取200μL500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液，在PBS中进行1：2连续稀释，得到约250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀释的β-内酰胺酶标准品。
2.3如说明书中的表1和2中所述，将含有β-内酰胺酶标准品和含β-内酰胺酶的测试样品的系列稀释液加入到96孔透明底部微量培养板中。
3.准备β-内酰胺酶测定混合物：
将50μL硝基呋喃储备溶液（组分A）加入5mL组分B中，充分混合，制成β-内酰胺酶测定混合物（组分A + B）。
注意：这种β-内酰胺酶测定混合物足以用于一个96孔板。 β-内酰胺酶测定混合物不稳定，每次使用都要新鲜。
4.运行β-内酰胺酶测定：
4.1将50μLβ-内酰胺酶测定混合物（来自步骤3）添加到β-内酰胺酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。
注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLβ-内酰胺酶测定混合物。
4.2在室温下孵育反应30-60分钟，避光。
4.3使用吸光度读板仪检测OD比为490/380 nm时的吸光度增加。
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文献和实验参考文献
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Fine mapping of the sequence requirements for binding of beta-lactamase inhibitory protein (BLIP) to TEM-1 beta-lactamase using a genetic screen for BLIP function
Authors: Yuan J, Huang W, Chow DC, Palzkill T.
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