α-促黑素细胞刺激素药盒操作说明书
α-MSH (HY-10218)RIA KIT
促黑素细胞刺激素(α-Melanocyte Stimalating Hormoneα-MSH)是一种内源性的神经调节肽,人类垂体细胞及许多垂体外细胞都可产生。通过与其受体结合发挥作用。在生理状态下,αMSH在体内的浓度非常低,变化范围小。当机体产生炎症时,αMSH在血桨中浓度增高,αMSH具有强有力的抗炎免疫调节能力,抑制前炎症细胞因子的生成及活性,使巨噬细胞合成一氧化氮减少,抑制中性粒细胞的趋化性,调整前列腺素的合成,促进抗生细胞因子IL-10的合成。
药盒组成:
1、 125I-αMSH(冻干品) 1 瓶。
2、 αMSH抗体(冻干品) 1 瓶
3、标准品β-EP(冻干品)6瓶,浓度分别为0、0.5、1、2、4、8ng/ml。
4、分离剂(第二抗体)一瓶。
5、缓冲液1瓶。
α-促黑素细胞刺激素药盒操作说明书实验步骤:
1、取组织(米粒大小),立即称重后加到1ml 100℃生理盐水中煮沸5分钟后迅速冷却,再加0.5ml 1N醋酸制成匀浆,置4℃ 1-2小时后离心2000 G 15分钟,取上清,冷冻干燥后用RIA缓冲液复溶,进行RIA测定。或煮沸迅速冷却后用0.1N盐酸制成匀浆,置4℃1-2小时后再用0.1N NaOH中和,离心取上清液-20℃保存待测。
2、测定方法:本实验采用平衡法,取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:
α-MSH RIA 加样程序 单位:ul
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试 剂 T NSB S0 S1—S5 标 本
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缓 冲 液 —— 200 100 —— ——
MSH 标 准 —— —— —— 100 ——
标 本 —— —— —— —— 200
抗 体 —— —— —— —— 100
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4℃ 放置24小时
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125I-α-MSH 100 100 100 100 100
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4℃ 放置24小时
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分 离 剂 500 500 500 500 500
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振荡3分钟,3000转/分 离心 15分钟,弃上清,测沉淀计数cpm。
结果计算:
以N/T、B/T计算NBS、S0结合百分率,以B/B0计算标准及待测样品结合百分率,
在半对数坐标纸上绘制标准曲线,并查出样品值。或由自动γ计数器预先编制程序,直
接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。
α-促黑素细胞刺激素药盒操作说明书注意事项:
本月标准品每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释
本月药盒有效期为一个月,分离剂在使用前充分混匀(不可冰冻)
正常参考值:0.6~1.2ng/ml
本药盒技术参数:
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T NSB S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 s8
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CPM
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N/T% B0/T% B/ B0 %
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