转化生长因子-β放免药盒操作说明书

转化生长因子-β放免药盒操作说明书

TGF-β（HY-10118）RIA KIT

转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)是属于一组新近发现的调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。TGF-β的命名是根据这种细胞因子能使正常的成纤维细胞的表型发生转化，机体多种细胞均可分泌非活性状态的TGF-β， 活化后T细胞或B细胞产生TGF-β水平比静止细胞明显为高。几科所有肿瘤细胞内可检测到TGF-βmRNA 。TGF-β具有广泛生物学作用。TGF-β在治疗伤口愈合，促进软骨和骨修复以及通过免疫抑制治疗自身免疫性疾病和移植排斥等方面有潜在的应用前景。

测定盒组成（常温运输，4℃保存）

1、TGF-β标记一瓶 。 2、TGF-β抗体一瓶。 3、缓冲液一瓶。

4、分离剂（第二抗体）一瓶。

5、TGF-β 标准品6瓶：5、10、20、40、80、160pg/ml。

样品收集：

1．常规静脉取血，分离血清-20℃保存备用，（样品冰冻保存一个月内测定）。

1． 组织：取新鲜活组织即刻置液氮中保存。或快速称取10-20mg置微型匀浆器中，加无水乙醇0.1ml研磨，再加生理盐水0.1ml充分研磨制成匀浆， -20℃以下保存，测定前4℃离心（3000 rpm/ min 15min）取上清测定（浓度高时作适当稀释）。

2． 尿液：收集12小时尿液，即晚7时排尿，向容器内加冰醋酸或甲苯2ml防腐，至次日早7时留取12小时内尿液收集至瓶中，混匀，量总ml数，留5ml

放-20℃以下保存。测定前调至pH 7.0。

转化生长因子-β放免药盒操作说明书测定方法：

本法采用非平衡法，全部测定在聚苯乙烯管中进行。

TGF-β RIA 操作程序（单位：ul）

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试 剂 T NSB S₀ S₁~S₅ 样 品

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缓 冲 液 —— 250 200 —— ——

标 准 品 —— —— —— 200 ——

样 品 —— —— —— —— 200

抗 体 —— —— 50 50 50

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充分混匀，4℃ 24小时

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¹²⁵I-­ TGF-β 50 50 50 50 50

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充分混匀，4℃ 24小时

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分 离 剂 —— 500 500 500 500

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混匀，混匀3500 转/分 4℃ 离心20分钟去上清，测定沉淀cpm值。

结果计算：

以N/T、B/T计算NSB、S₀结合百分率，以B/B₀计算标准及待测物结合百分率，在

半对数座标纸上绘制标准曲线，并查出样品值或由自动Υ-计数仪器直接读出结果。

转化生长因子-β放免药盒操作说明书 注意事项：

本月药盒抗体每瓶用 ml缓冲液稀释

本月药盒标记每瓶用 ml缓冲液稀释；

本月药盒标准每瓶用 ml缓冲液稀释

本月分离试剂在使用前充分混匀（不可冰冻）。

测定兔血清时，应改用25%PEG做分离剂，每管加500ul（离心前，NSB、S₀~S₅

管补加Υ球蛋白液100ul/管，样品管补加PBS 100ul/管，然后再加25%PEG500ul）。

本试剂盒主要技术参数：

NSB：<4%。

标准曲线范围：5-160 pg/ml。

灵敏度：<5pg/ml。

精密度：批内CV<4.4%,

回收率：97~103。

特异性： CV<0.1%。

正常参考值范围： 10-20pg/ml 均值：15.25±3.21pg/ml

附注：

1、血液采集后尽快分离血浆，放-20℃以下保存至少3个月内稳定。

2、组织样品测出样品浓度后，再根据称取组织量，计算出每mg组织中的

浓度。尿液样品从每ml浓度再计算出每小时或每分钟排出量。

3、¹²⁵I-TGF-β冻干品请在使用前配制。

4、本试剂盒有效期为40天。

本月药盒参考数据：

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T NSB S₀ S₁ S₂ S₃ S₄ S₅

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CPM

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N/T% B₀/T% B/ B₀ %

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