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文献和实验到纯化的问题,大大简化了纯化的步骤,但还是会遇到些实际的问题,所以需要详细阅读使用说明和注意事项。(一)HIS 标签重组蛋白可以很方便用镍琼脂糖凝胶FF 分离,色谱填料已经螯合好了镍离子,使用非常方便,吸附载量更高,特异性更强,可以选择多种洗脱方式,是纯化这类融合蛋白的最佳工具。(二)ST 融合蛋白在表达时同时表达了谷胱甘肽s 转酶,很方便用GST 琼脂糖凝胶FF 分离,然后再用肠激酶或凝血酶等酶解就得到表达的产物。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF 或苯甲脒琼脂糖凝胶FF 分离。(三)白A 融合
。而凝血酶可以用肝素琼脂糖凝胶FF或苯甲脒琼脂糖凝胶FF分离。 (三) 白A融合蛋白可以用IgG琼脂糖凝胶FF分离。 (四) 涵体蛋白的色谱复性: 离子交换和疏水色谱都在包涵体复性中有很好的效果,金属螯合色谱填料等亲和色谱填料也常用于带HIS标签融合蛋白的色谱复性。 8. 疫苗的纯化 疫苗可以用琼脂糖凝胶FF分离。 9. DNA疫苗的纯化 DNA疫苗要求超螺旋DNA含量大于90%,用DNA纯化琼脂糖凝胶FF就可以专门用于各种结构的DNA的分离,一步色谱后超螺旋含量可大于90
用张龙翔书里的办法,先提卵类粘蛋白,首先过SEPHADEX G-25 柱子脱盐,然后过DEAE纤维素离子交换柱;第二步是用卵类粘蛋白合成SEPHAROSE-4B亲和柱。这些层析过程都可以在缓冲液里面加0.02%的叠氮化钠抑菌吗?以后怎样去除? 我提胰蛋白酶粗酶用的乙醇,可以用异丙醇或正丁醇或其它的低分子醇吗?浓度多大为好? 那实验我知道,你用什么方法活化琼脂糖呢,胰蛋酶的亲和纯化方法很多,配基有大豆胰蛋白酶抑制剂,抑肽酶,苯甲脒类,特别是后面的苯甲脒,可以买到现成的苯甲脒琼脂糖凝胶,何必自己去提取
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