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文献和实验一、TUNEL法的实验原理 细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖
Y27632 - - 10μM - DMSO - - - 10% 组织处理 1、将取样培养基中的组织转移到培养皿中,用 PBS 多次冲洗至液体变澄清。然后用无菌手术刀剔除脂肪及坏死组织。 2、将组织切割为 1–2 mm3 的小块,此步骤可以留存适量组织用于测序、免疫组化分析等。 3、将所有剩余的组织碎片收集到 30 ml 锥形管中,加入 8 ml 解离培养基,并在 37°C条件下解离 1-2h。每隔 20min,利用移液器机械吹打
c,用-20度预冷的丙酮冷冻固定10分钟 d,PBS清洗 10minX2 e,用新鲜配制的通透液(含0.1%的Triton X-100和0.1%的柠檬酸钠溶液) 室温通透15min。 f,PBS清洗 10minX2 g. 阳性对照组加入DNase I 40ul(1u/ul),37度孵育15min h. PBS清洗 10minX2 i. Roehe试剂盒中的的TUNEL反应缓冲液(含FITC标记的dUTP)和脱氧核糖 核酸末端
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