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文献和实验乙酸和 0.07% β-巯基乙醇(2ME) (V/V ) 的丙酮(低温)。应在使用前新鲜配制,并置于 -20°C 条件下直到使用(见注释 1)。 注意:3 种试剂均有毒,必须在通风橱中配制。 2.2 清洗溶液 含 0.07% 2ME(V/V ) 的丙酮,可在 -20°C 下贮存约 1 个月。 2.3 R2D2 蛋白质溶解缓冲液 5 mol/L 尿素、2 mol/L 硫脲、2% 3- [ 3 - ( 胆酰胺丙基)二甲氨基 ] 丙磺酸内盐 ( CHAPS;m/V ) 、2%
溴水氧化能力较弱,它把醛糖的醛基氧化为羧基。当醛糖中加入溴水,稍加热后,溴水的棕色即可褪去,而酮糖则不被氧化,因此可用溴水来区别醛糖和酮糖。 3.成苷作用 单糖环状半缩醛结构中的半缩醛羟基与另一分子醇或羟基作用时,脱去一分子水而生成缩醛。糖的这种缩醛称为糖苷。例如α-和β-D-吡喃葡萄糖的混合物,在氯化氢催化下同甲醇反应,脱去一分子水,生成α-和β-D-甲基吡喃葡萄糖苷的混合物。 α-和β-D-吡喃葡萄混合液 β-D-甲基吡喃葡萄糖苷
原理 GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白,并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水,过滤除菌,分装,-20℃保存。u Lysis buffer (50ml)1)2.5ml 1 M Tris,pH8.0 2)0.1ml 0.5ml EDTA 3)0.292
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