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上海古朵生物科技有限公司
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文献和实验蛋白来源：肿瘤手术标本 蛋白名称（可保密）：转录因子 蛋白分子量：33 KDa WB用膜类型、孔径：PVDF膜 转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流 转膜时间：150 min 转膜设备：湿转 Bio-Rad 说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果
对将目的蛋白清晰从分子量大小类似蛋白中清晰分离出来很重要，常见 SDS-PAGE 分离胶浓度为 8% 和 12.5% 两类，分子量大小不同靶蛋白应选择合适浓度分离胶。*选择脂质合成限速酶基因（ACC1，265kD）和甘油三酯酯酶（ATGL，55kD）用于探讨分离胶浓度分离效果，下文中除去探讨条件外其余条件皆一致。1.对分子量较大的蛋白质（>200kDa）2．对分子量较小的蛋白质(（二）转膜条件*转膜时间、电压和转膜缓冲液甲醇比例等对结果影响较大，因此根据研究的靶蛋白特点选择合适转膜条件至关
。我们推荐按照制造商的说明进行操作。应使用还原型凝胶，除非抗体数据表中推荐使用非还原性条件。凝胶百分比取决于蛋白质的大小：4～40 kDa12～45 kDa10～70 kDa15～100 kDa25～200 kDa20%15%12.5%10%8%四、将蛋白质从凝胶转移到膜上如下制备转移堆叠体：膜可以是硝酸纤维素或 PVDF，两者各具优点。用甲醇「活化」PVDF 1 分钟，并在制备堆叠体之前用转膜缓冲液冲洗 PVDF。可能需要对时间和电压进行一些优化。我们推荐按照制造商的说明进行操作。可在封闭步骤之前
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