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文献和实验组织切片的免疫酶标抗体染色法 1)4%多聚甲醛固定的组织置15%~20%蔗糖PBS中漂洗,4℃过夜或组织块下沉至 杯底; 2)制作30~40um厚的振动切片或冰冻切片,PBS漂洗; 3)2%H2O2甲醇处理,室温20分钟,封闭内源性过氧化物酶活性; 4)1%BSA室温孵育15分钟; 5)第一抗体4℃孵育12~24小时,PBS漂洗; 6)HRP或生物素标记的第二抗体室温孵育30―60分钟,如系生物素标记的第二抗体,反应后则需进一步按ABC法要求操作
・ Histological techniques (William H. Heidcamp) Very detailed guide to histological techniques, like fixation, dehydration, embedment and subsequent sectioning. ・ Cryosectioning (House Ear Institute)
组织切片的优缺点: 1)冷冻切片: 优点是操作简单,组织的抗原性保存好,自发荧光较少,特异荧光强,同时适用于不稳定的抗原,缺点是组织结构欠清晰; 2)石蜡切片: 优点是组织细胞的精细结构显现清楚医学|教育网搜集整理,缺点是对抗原的保存量不如冷冻切片,并有组织自发荧光和非特异性荧光,需加酶消化处理。
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