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文献和实验② 用50%去离子甲酰胺37℃孵育15min; ③加预杂交液20μl/片,在杂交温度下孵育30min~2hr。 二、杂交 1. 试剂与配制 杂交液:50%去离子甲酰胺,5×SSC,10%硫酸葡聚糖,5×Denhardt’s 液,2%SDS,10mg/ml变性的鲑鱼精DNA 2. 操作方法 ① 弃预杂交液,加杂交液(含0.2~5μg/ml探针)10~20μl/片,覆盖经硅化的盖玻片,石蜡膜封片或橡皮泥封片; ② 玻片置于湿盒中,42℃杂交12~18hr(过夜
蓝。 甲醛:用水配成37%浓度(12.3mol/L)。应在通风柜中操作,pH高于4.0 去离子甲酰胺。 50mmol/L NaOH(含10mmol/l NaCl)。 0.1mol/L Tris·HCl,Ph7.5。 (2)步骤 ①40ml水中加7g琼脂糖,煮沸溶解,冷却到60℃,加7ml 10×MSE缓冲液、11.5ml甲醛,加水定容 至70ml,混匀后 倒入盛胶槽。 ②等胶凝固后,去掉梳子和胶布,将盛胶槽放入1×MSE缓冲液的电泳
荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)
放大,因此灵敏度不如间接标记的方法。实验用具及材料相关溶液的配制1)20×SSC:175.3g NaCl,88.2g柠檬酸钠,加水至1000mL(用10mol/L NaOH调pH 至7.0)。2)去离子甲酰胺(DF):将10g混合床离子交换树脂加入100mL甲酰胺中。电磁搅拌30min,用Whatman l号滤纸滤。3)体积分数70%甲酰胺/2×SSC:35mL甲酰胺,5mL 20×SSC,10mL水。4)体积分数50%甲酰胺/2×SSC:100mL甲酰胺,20mL 20×SSC,80mL水。5)体积
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