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- YB-E13457
- 2025年07月12日
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- 库存：
大量
- 供应商：
钰博生物
- 检测范围：
见说明书
- 检测方法：
酶联免疫
- 应用：
科研
- 样本：
血清/组织/尿液
（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；
（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（3）酶的底物；
（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
（5）结合物及标本的稀释液；
（6）洗涤液；
（7）酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
（一）抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度（参考：5ug/ml），加入酶标板（50ul/孔），以胶带封口，于4℃过液。
2.弃抗体液，以双蒸水冲洗3次，自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板，备用。
（二）底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物（参考：5mg/10ml），加入酶标板中（50ul/孔），以胶带封口，37℃避光保存2h，在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
（三）酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本，加至已包被抗体的酶标板中（50ul/ 孔）；用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数（参考：40~4000倍），同时加入酶标板中（50ul/ 孔），混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次，然后于吸水纸上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min，在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释（预试中确定）加入包被有已知抗原的酶标板中（50ul/孔），加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液，以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体（浓度在预试中确定）。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物（浓度在预试中确定），加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min，其间不时观察，显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值，OPD用492nm测定，TMB用450nm测定。
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文献和实验肝纤维化四项：⑴层粘连蛋白（LN）、⑵Ⅲ型前胶原N端肽（PⅢNP）、⑶Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）、⑷透明质酸（HA）。 一参考值： HA ＜120μg/L LN ＜130μg/L Ⅳ-C ＜140μg/L PⅢNP ＜12μg/L 二、临床意义：
上都带上了外源肽，当外源肽太大时则会影响衣壳蛋白的正常功能。对pⅢ蛋白来说，则不能识别大肠杆菌的性菌毛，使噬菌体不能感染和增殖；对pⅧ蛋白来说，则不能组装成病毒颗粒。 一般可以通过在基因组中除了有一个插入外源基因的户Ⅲ和户Ⅷ基因外，再引入一个野生型基因。这样在噬菌体外壳上既有含融合表达外源肽的蛋白，也有野生型的蛋白质，从而不影响噬菌体的识别感染和组装功能。这种展示方式为图33型或88型。
多肽便与噬菌粒载体的衣壳蛋白融合表达在噬菌体外表面，但是这个噬菌体失去了感染雄性大肠杆菌的能力(对pⅢ而言)或维持噬菌体衣壳的完整性(对pⅧ而言)，是一种不完全的噬菌体。因此噬菌粒在感染宿主细菌后，与复制、包装有关的功能信息和蛋白质均由辅助噬菌体提供(如M13K07、R408或VCS―M13，图9―3中的3-t-3型和8+8型)。当噬菌粒感染了一个宿主细胞后，一般用辅助噬菌体对同一宿主细胞进行超感染，提供野生型pⅢ或pⅧ分子。当噬菌体颗粒组装时，噬菌粒DNA单链的包装优先于辅助噬菌体，其衣壳蛋白p
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