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- 2025年07月02日
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- 技术资料
- 库存：
大量
- 供应商：
钰博生物
- 检测范围：
见说明书
- 检测方法：
酶联免疫
- 应用：
科研
- 样本：
血清/组织/尿液
（1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；
（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（3）酶的底物；
（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；
（5）结合物及标本的稀释液；
（6）洗涤液；
（7）酶反应终止液。
一、免疫吸附剂
已包被抗原或抗体的固相载体在低温（2~8℃）干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试剂盒，仅供应包被用抗原或抗体，检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。
仓鼠甲状腺结合球蛋白(TBG)检测试剂盒实验步骤
一、预试验
（一）抗体包被的酶标板的制备
1.以碳酸盐缓冲液将抗体稀释成适当浓度（参考：5ug/ml），加入酶标板（50ul/孔），以胶带封口，于4℃过液。
2.弃抗体液，以双蒸水冲洗3次，自然干燥后以胶带封口。此为由已知抗体包被的酶标板，备用。
（二）底物浓度的摸索
在底物缓冲液中加入不同量的底物（参考：5mg/10ml），加入酶标板中（50ul/孔），以胶带封口，37℃避光保存2h，在没有明显变色的条件下选择尽可能大的底物浓度。
（三）酶标抗原浓度的摸索
选择明确为阴性的标本，加至已包被抗体的酶标板中（50ul/ 孔）；用稀释液稀释酶标抗原至适当倍数（参考：40~4000倍），同时加入酶标板中（50ul/ 孔），混合后封口后于37℃作用30min。以洗液连续冲洗5次，然后于吸水纸上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用30min，在保持有明显变色的条件下选择尽可能小的酶标抗原浓度。
二、仓鼠甲状腺结合球蛋白(TBG)检测试剂盒正式试验
1. 以稀释液将待检标本做适当稀释（预试中确定）加入包被有已知抗原的酶标板中（50ul/孔），加封口胶带于37℃作用30min。
2. 弃反应液，以冲洗液连续洗板5次并于吸水纸上拍干。
3. 加入酶标抗体（浓度在预试中确定）。加封口胶带后于37℃作用30min。
4. 重复第2步。
5. 加底物（浓度在预试中确定），加封口胶带后于室温下避光作用5-60 min，其间不时观察，显色满意后加终止液50ul/孔。
6. 于酶标仪测定OD值，OPD用492nm测定，TMB用450nm测定。
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文献和实验甲状腺素结合球蛋白的临床意义，医学|教育网整理相关知识如下： 1.TBG为肝细胞合成的一种α-球蛋白，由395个氨基酸残基和4条门冬酰胺联接的寡糖链构成，分子量约54kD.TBG为血液中甲状腺激素的主要结合蛋白，约70%T4和T3与其结合。TBG浓度改变对TT4的影响十分显著，对TT4、TT3检测结果，尤其是与临床表现不相符合时的解释有重要意义。 2.为排除TBG浓度改变对TT4、TT3水平的影响，可用TT4（μg/L）/TBG（mg/L）的比值进行判断。若此比值
血清中99.95%以上的T4与蛋白结合，其中80%～90%与球蛋白结合称为甲状腺素结合球蛋白(简称TBG)。TT4是指T4与蛋白结合的总量，受TBG等结合蛋白量和结合力变化的影响，TBG又受妊娠、雌激素、病毒性肝炎等因素影响而升高，受雄激素、低蛋白血症(严重肝病、肾病综合征)、泼尼松等影响而下降，在临床上必需注意。 血清TT4测定方法有放射
3．运输 T 4 与T 3 释放入血之后，以两种形式在血液中运输，一种是与血浆蛋白结合，另一种则呈游离状态，两者之间可互相转化，维持动态平衡。游离的甲状腺激素在血液中含量甚少，然而正是这些游离的激素才能进入细胞发挥作用，结合型的甲状腺激素是没有生物活性的。能与甲状腺激素结合的血浆蛋白有三种：甲状腺素结合球蛋白（thyroxine-binding globulin,TBG）、甲状腺素结合前白蛋白(thyroxine-binding
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