磷酸酶抑制剂混合物3，P0044-1ML

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 注意：在准备做磷酸（酯）酶实验的时候，不加磷酸酯酶抑制剂。 一、工作液配制 配制 100 ml 的 modified RIPA buffe： 1.称取 790 mg 的 Tris-Base，加到 75 ml 去离子水中，加入 900 mg 的 NaCl，搅拌

找抗体找到崩溃？一篇 Science 简单搞定

Sabatini 指出，mTORC1 底物的磷酸化位点 + 1 位的氨基酸一般倾向于含有苯环结构的氨基酸。如上图所示，F（苯丙氨酸）、P （脯氨酸）、W （色氨酸）、Y （酪氨酸）和 V （缬氨酸）都含有苯环或者类似的结构。下边就好办了，根据你的底物蛋白序列，选择合适的泛磷酸化抗体就可以了。以笔者研究的一类 mTORC1 蛋白底物为例。我研究的底物蛋白含有 + 1 位为 P 的蛋白序列，我选择的就是识别 S*/T*P 的泛磷酸化抗体 （在这之前，我也是像无头苍蝇一样尝试了近十种不同公司的泛磷酸化抗体，基本

免疫共沉淀实验指南

-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集