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- HH-002023
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
南京赛泓瑞
- 规格：
10 MG
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文献和实验气泡。加样时间宜控制在10分钟内。 洗涤：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350 μL，浸泡1-2分钟，吸去或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。重复此洗板步骤3次。提示：此处与其他洗板步骤都可用洗板机。每一步洗涤充分是实验的根本。 HRP酶结合物：每孔加酶结合物工作液100 μL，混匀，加上覆膜，37℃孵育30分钟。 洗涤：弃去孔内液体，洗板5次，方法同步骤2。 底物：每孔加底物溶液(TMB)90 μL，混匀，加上覆膜，37℃避光孵育15分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短
体，洗板 5 次，方法同步骤 3。 底物：每孔加底物溶液(TMB) 90 μL，混匀，加上覆膜，37℃ 避光孵育 15 分钟左右。提示：根据实际显色情况酌情缩短或延长孵育时间，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。 终止：每孔加终止液 50 μL，终止反应。提示：终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 读值：立即用酶标仪在 450 nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪预热，设置好检测程序。 实验完毕后，将未用完的试剂按规定
室所用洗板机3次洗板即可达到要求。 六、显色 在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或 粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37 ℃或室温反应15～30分钟。从理论上说，37 ℃30分钟才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10分钟内，绝大部份催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37 ℃下反应25～30分钟后，终止反应比色
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