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市场上常用的甲酰胺杂交液是通过干扰碱基配对的氢键来降低DNA双链熔点及稳定性。当双链
分开后,探针同DNA单链杂交过程同样是通过氢键碱基配对,甲酰胺对这一杂交过过程同样到干扰作用,导致杂交速度缓慢,从而需要过夜杂交。IQFISH杂交液对碱基配对无干扰,而是通过
减弱碱基堆积力来降低双链稳定性来变性 DNA 。当探针与单链通过氢键碱基配对时,由于没有任何干扰,杂交可以瞬间发生。
IQFISH 快速杂交液提供:
- 快速结果,IQFISH 1-2小时杂交
- IQFISH 杂交液瞬间生成信号,2分钟即可生成可观测信号
- 高品质信号,高性噪比
- 最新:细胞涂片上也可以进行快速杂交
其它包装规格请访问:www.agilent.com/genomics/surefish
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文献和实验,终止反应。(5)15000rpm离心30s,置于冰上待用。2.预杂交 按100cm2膜用20~40ml预杂交溶液,预杂交时使溶液处于流动状态。预杂交液组成:5㗓SC0.5%(W/V)封阻试剂(管11)0.1%(W/V)N-十二烷酰肌氨酸钠0.02%(W/V)SDS膜放入塑料袋,灌入预杂交液,排除气体后密封,在65℃预杂交过夜。3.杂交 按100cm2膜用2.5ml杂交液,杂交时偶尔摇动杂交袋,使里面的溶液重新分配。 杂交液组成: 50%甲酰胺(V/V) 5%(W/V)封阻试剂 5㗓SC
Hybridization Chamber,旋盖式的设计和1.8ml的容积,避免了传统coverslip式杂交盒的弊端。可以单独购买。7899-1 Altas Glass Hybridization Chamber each 8016-1 GlassHyb Hybridization Solution 50ml2. Clontech ExpressHyb Hybridization Solution快速杂交液能有效加快杂交速度,减少杂交时间,同时提高灵敏度。适用于各种基于膜的核酸杂交反应,如cDNA Array
,其优点在于简便,快速,其敏感性可与放射性同位素标记核酸探针相等。不少实验室报告应用FISH(2~5kbp探针)可成功地达到单个拷贝(copy)的特异性定位。 2.荧光标记DNA探针应用于ISHH中的基本原则(Barbara Traok和Dan Pinkel 1990) (1)首先应使组织或染色体中靶核苷酸高温加热变性解离为单链DNA,化学性标记的DNA探针除外。 (2)杂交:一般在37℃进行,探针稀释浓度在2ng/μl,染色体铺片探针浓度在0.4ng
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