裂解液VIII：细菌活性化蛋白制备溶液

不同样本破碎和匀浆中常见问题及解决方案

FFPE 样本 FFPE 样本中的核酸在进⼊福尔马林浸泡之前就开始发⽣降解；样品基质内核酸易发⽣⽚段化、核苷酸碱基修饰以及核酸与蛋⽩的交联。 解决方案 1. 使用厚度不超过 5 mm 的组织样本，组织固定前的操作时间应当越短越好，避免 RNA 降解。 2. 不要过度固定（最多 24 h），固定时间越长，交联程度越⼤，样本中的 RNA 降解越厉害。 3. 推荐使⽤中性的福尔马林缓冲溶液及优质试剂进行石蜡包埋，不含添加剂。 4. 尽可能避免样品染色。 5. 可考虑使用专门的环保型脱蜡液，降低对实验环境

蛋白质浓缩提取和细胞裂解产品介绍

,分别可用于在变性和非变性条件下的细胞裂解产物的制备.其中,非变性裂解液(C1050)含有非离子化去污剂,盐和蛋白磷酸化酶抑制剂.它可以在非变性条件下裂解细胞并释放绝大多数细胞浆和膜蛋白,因此适用于针对内源性蛋白位点的抗体的免疫沉淀.如果抗原为不可溶性(如细胞骨架,chromatin,membrane rafts 等),或者内源性蛋白的活性位点存在于蛋白折叠结构中,则可以用变性裂解液(C1052)来提取细胞裂解产物,而且,由于体外翻译的蛋白常常趋向于形成聚合物,所以应在变性条件下进行细胞裂解产物的制备

免疫沉淀原理

IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合到抗体（免疫球蛋白）的FC片段的现象开发出来的方法。目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心，可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。 免疫沉淀实验的操作步骤比较多，同时由于在非变性条件下进行实验，所以要得到一个完美的实验结果，不仅需要高质