同位素法DNA南方杂交试剂盒

如何做好 Southern 杂交？

，然后将 NC 膜夹在两层滤纸间，保存于干燥处。五、探针标记进行 Southern 杂交的探针一般用放射性物质标记或用地高辛标记。放射性标记灵敏度高，效果好；地高辛标记没有半衰期，安全性好。这里介绍放射性标记。探针的标记方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法，有一些试剂盒可供选择，操作也很简单。以下为 Promega 公司随机引物试剂盒提供的标记步骤：1. 取 25~50 ng 模板 DNA 于 0.5 mL 离心管中，100 ℃ 变性 5 min，立即置冰浴。2. 在另一个 0.5 mL 离心管中

待检测样品制备

Kit(Cat.No.900182,10次标记)，通过试剂盒提供的生物素标记的核糖核酸和T7 RNA聚合酶，以体外转录（IVT）的方式扩增并标记cRNA探针。试剂盒提供体外转录和标记的所有试剂，可以作10个反应。标记好的探针经过随机片断化（fragmentation，试剂自行配制）后得到大小约为35-200个碱基大小的RNA片断即可和芯片进行杂交。 2）Affymetrix公司的Genotyping（如人类SNP图谱分析芯片）和健康研究芯片： 这一类芯片用于检测样品基因组的变异，因而只需纯化基因组DNA

体外转录实用技巧

生成全长转录组 使用 Ambion 转录试剂盒合成的大多数 DNA 模板都可以生成全长转录组，无需任何优化。然而，一些模板可能产生过早终止的产物，如较小的离散带或拖尾/降解产物。对于印迹杂交，通常不需要全长 RNA 探针。然而，对于许多其他分析，至关重要的是转录进行到模板的末端，全部生成同一种大下的转录组（例如 NPA，体外翻译研究和结构分析）。转录反应失败或不良的两个最常见因素是标记核苷酸中的抑制剂和质量较差的 DNA 模板。应执行一系列简单的实验来确定转录反应失败的原因；随附的流程图概述