MMLV（H点突变）

基因编辑再次升级！领域大牛刘如谦 Cell 发文开发新工具，可安全高效进行体内基因编辑

了先导编辑（Prime Editor, PE）。刘如谦带领团队开发的这一系列基因编辑工具能够在不造成 DNA 双链断裂的情况下，实现对基因组的点突变进行定点矫正修复，因此被认为是比较安全的，也更具有临床应用前景。前期的研究工作也已经证实可以应用 BEs 来纠正小鼠和非人灵长类动物的致病点突变并改正疾病表型，强调体内碱基编辑作为一种治疗策略的潜力。 要想将碱基编辑技术广泛应用于临床治疗，那么就需要安全有效的方法将单碱基编辑器输送到多个组织和器官。截至目前，最常用和最有效的载体仍然涉及病毒的使用

反转录过程中需要考虑哪些因素？

录酶是实验室中首批用于 cDNA 合成的酶之一。该酶是一种分子量为 170-kDa 的异二聚体，最佳反应温度范围为42-48℃。AMV 反转录酶具有较强的 RNase H 活性，可降解 RNA:cDNA 复合物中的 RNA，获得的 cDNA 片段较短（ MMLV 反转录酶因具有单体结构而成为常用的替代品，可对重组酶进行更简单的克隆和修饰。MMLV 反转录酶是一种分子量为75 kDa 的酶，反应温度约为37°C。虽然 MMLV 的热稳定性低于 AMV 反转录酶，但其 RNase H 活性较低，因此具有

定量实验做了千千万，这些细节你注意到了吗？

RTase 两大类：AMV RTase 的 RNase H 活性强，合成长度短，合成量低，热稳定性好（42～55℃）；MMLV RTase 的 RNase H 活性弱，合成长度长，合成量高，热稳定性差（37～42℃）。由于 RNase H 酶具有降解 RNA 模板的功能，所以在逆转录时应该优先选择 RNase H 活性弱的 MMLV ，而且后期经过基因工程改造，MMLV 热稳定性已达到质的飞跃。以 Yeasen 的 Hifair® Ⅲ 逆转录酶（11141）为例，该酶经基因工程改造，删除了 RNase