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以下的操作步骤是最初由Byum.设计的程序的众多改良版本中的一种。此程序的改良是通过运用除去血液中的纤维蛋白或抗凝血剂处理人体血液;这种改良对于其他物种来源血液或者其他组织非常有必要。
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2. 无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。
3. 混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2 ml 生理盐水
4. 仔细的将稀释血液加入3 mlLSM(室温)于15ml离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。猫NK细胞无血清培养基不要将稀释血液混合入LSM中。
5. 室温下400g离心15-30分钟,离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以再LSM上形成一层单核淋巴细胞,如上图所示。
6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中,室温离心10分钟,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻,例如160 - 260 x g(去除LSM和降低血小板的百分比)。
8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞,用适当的培养基重悬细胞。
猫NK细胞无血清培养基方法概述:
分离混合血液白细胞早期的方法,总是伴随红细胞聚集,只轻微影响白细胞。通过离心,红细胞密度增加聚集,同时可以从离心管上部收集白细胞。
Byum提出了一种更方便,通过使用Ficoll 甲泛影钠溶液离心快速分离方法。稀释的血液在Ficoll甲泛影钠溶液中分层,低速短时离心。红细胞和沉降到管底的粒细胞,和单个核细胞(淋巴细胞)和血小板可以从两个分层之间收集。
许多研究者不断努力,修订了Byum方法,MP生物医学公司生产的LSM,方法的独特之处是运用,泛影钠成功的代替了甲泛影钠。
猫NK细胞无血清培养基相关产品如下:xy11154 人大肠癌细胞,PA319细胞
xy11155 人大肠癌细胞,KM-12细胞,
xy11156 人大肠癌细胞,CL187/CCL187细胞
xy11157 人成纤维肉瘤细胞,HT1080细胞
xy11158 人成神经瘤细胞-骨髓 SK-N-DZ细胞
xy11159 人成年皮肤成纤维细胞,HS683细胞
xy11160 人成巨核细胞白血病细胞,MEG-01细胞
xy11161 人成巨核细胞白血病细胞,Daudi细胞
xy11162 人成骨肉瘤细胞,Saos-2细胞,
xy11163 人成骨肉瘤细胞,MG-63细胞
xy11164 人肠系膜下腔动脉血管内皮细胞,Ealy926细胞
xy11165 人表皮癌细胞,A-431细胞,
xy11166 人鼻咽癌细胞系 SUNE-1亚株6-10B细胞
xy11167 人鼻咽癌细胞系 SUME-a细胞
xy11168 人鼻咽癌细胞系 HNE2-LMP1/2细胞
xy11169 人鼻咽癌细胞(低分化) CNE2细胞
xy11170 人鼻咽癌细胞,SUNE1细胞
xy11171 人鼻咽癌细胞,HONE-1细胞
xy11172 人鼻咽癌细胞,HNE3细胞
xy11173 人鼻咽癌细胞,HNE-2细胞
xy11174 人鼻咽癌细胞,HNE1细胞
xy11175 人鼻咽癌细胞,CNE细胞
xy11176 人鼻咽癌细胞,CNE-2Z细胞
xy11177 人鼻咽癌细胞,CNE-1细胞
xy11178 人鼻咽癌细胞,6-10B细胞
xy11179 人鼻咽癌细胞,5-8F细胞
xy11180 人鼻咽癌母系细胞,CNE-2Z细胞
xy11181 人膀胱移行细胞乳头瘤细胞,RT4细胞
xy11182 人膀胱移行细胞癌细胞,T24细胞
xy11183 人膀胱移行细胞癌 UM-UC-3细胞
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无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求,但对有些实验却不适合,如观察一种生长因子对某种细胞的作用,这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子;又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质(抗体、生长因子)的能力;或者要大规模的培养某种细胞,以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清培养基
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