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- 2025年07月13日
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上海信裕
以下的操作步骤是最初由Byum.设计的程序的众多改良版本中的一种。此程序的改良是通过运用除去血液中的纤维蛋白或抗凝血剂处理人体血液；这种改良对于其他物种来源血液或者其他组织非常有必要。
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2. 无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。
3. 混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2 ml 生理盐水
4. 仔细的将稀释血液加入3 mlLSM（室温）于15ml离心管中，在血液和LSM中形成一个明显的分层。猫单核细胞无血清培养基不要将稀释血液混合入LSM中。
5. 室温下400g离心15-30分钟，离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以再LSM上形成一层单核淋巴细胞，如上图所示。
6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中，室温离心10分钟，离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。
8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞，用适当的培养基重悬细胞。
猫单核细胞无血清培养基方法概述：
分离混合血液白细胞早期的方法，总是伴随红细胞聚集，只轻微影响白细胞。通过离心，红细胞密度增加聚集，同时可以从离心管上部收集白细胞。
Byum提出了一种更方便，通过使用Ficoll 甲泛影钠溶液离心快速分离方法。稀释的血液在Ficoll甲泛影钠溶液中分层，低速短时离心。红细胞和沉降到管底的粒细胞，和单个核细胞（淋巴细胞）和血小板可以从两个分层之间收集。
许多研究者不断努力，修订了Byum方法，MP生物医学公司生产的LSM，方法的独特之处是运用,泛影钠成功的代替了甲泛影钠。
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文献和实验相关专题 经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养 领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免病毒污染造成的危害。 无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求
无血清培养基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求，但对有些实验却不适合，如观察一种生长因子对某种细胞的作用，这时需要排除其他生长因子的干扰作用。而血清中可能含有各种生长因子；又如需要测定某种细胞在培养过程中分泌某种物质（抗体、生长因子）的能力；或者要大规模的培养某种细胞，以获得它们的分泌产物。因此研制出无血清培养基
无血清培养基(serum free medium, SFM)：是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。简单地认为是体外细胞培养过程中的细胞培养基中不含有动物或人的血清，称为无血清细胞培养基。无血清培养基的基本配方是基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。大多数的无血清培养基含有必须的向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素，以及一些蛋白质如纤连蛋白、球蛋白、细胞生长因子等。无血清培养基被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊动物细胞以制备单克隆抗体、病毒抗原、重组
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