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大量
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上海信裕
以下的操作步骤是最初由Byum.设计的程序的众多改良版本中的一种。此程序的改良是通过运用除去血液中的纤维蛋白或抗凝血剂处理人体血液;这种改良对于其他物种来源血液或者其他组织非常有必要。
1. 轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合
2. 无菌转移3 mlLSM到15 ml离心管中。
3. 混合2 ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2 ml 生理盐水
4. 仔细的将稀释血液加入3 mlLSM(室温)于15ml离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。Hank’s液 含Ca、Mg离子、不含酚红不要将稀释血液混合入LSM中。
5. 室温下400g离心15-30分钟,离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以再LSM上形成一层单核淋巴细胞,如上图所示。
6. 吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆。
7. 吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中,室温离心10分钟,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻,例如160 - 260 x g(去除LSM和降低血小板的百分比)。
8. 用平衡盐缓冲液清洗细胞,用适当的培养基重悬细胞。
Hank’s液 含Ca、Mg离子、不含酚红方法概述:
分离混合血液白细胞早期的方法,总是伴随红细胞聚集,只轻微影响白细胞。通过离心,红细胞密度增加聚集,同时可以从离心管上部收集白细胞。
Byum提出了一种更方便,通过使用Ficoll 甲泛影钠溶液离心快速分离方法。稀释的血液在Ficoll甲泛影钠溶液中分层,低速短时离心。红细胞和沉降到管底的粒细胞,和单个核细胞(淋巴细胞)和血小板可以从两个分层之间收集。
许多研究者不断努力,修订了Byum方法,MP生物医学公司生产的LSM,方法的独特之处是运用,泛影钠成功的代替了甲泛影钠。
Hank’s液 含Ca、Mg离子、不含酚红相关产品如下:xy10189 小鼠淋巴样瘤细胞,P388D1细胞,
xy10190 小鼠淋巴样瘤 P388细胞,
xy10191 小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞) YAC-1 细胞
xy10192 小鼠淋巴瘤细胞,Yac-1细胞,
xy10193 小鼠淋巴瘤细胞,Nb2-11细胞
xy10194 小鼠淋巴瘤细胞,L5178Y细胞
xy10195 小鼠淋巴瘤细胞,EL4细胞
xy10196 小鼠淋巴瘤细胞,EL4.IL-2细胞
xy10197 小鼠淋巴结血管上皮样细胞,SVEC4-10细胞
xy10198 小鼠巨噬细胞,ANA-1细胞,
xy10199 小鼠精母细胞
xy10200 小鼠结肠腺癌细胞,CT-26细胞,
xy10201 小鼠结肠癌细胞,CT26.WT细胞,
xy10202 小鼠结肠癌细胞,CMT93细胞
xy10203 小鼠结肠癌 C26细胞,
xy10204 小鼠浆细胞瘤 MPC-11细胞
xy10205 小鼠间充质干细胞系 C3H10细胞
xy10206 小鼠畸胎瘤细胞,P19细胞,
xy10207 小鼠畸胎瘤细胞,F9细胞
xy10208 小鼠红白血病细胞,MEL细胞
xy10209 小鼠黑色素瘤细胞,B16细胞,
xy10210 小鼠黑色素瘤细胞,B16F1细胞
xy10211 小鼠黑色素瘤细胞,B16-F0-EGFP细胞
xy10212 小鼠黑色素瘤细胞,B16BL6细胞
xy10213 小鼠黑色素瘤高转移细胞,B16F10细胞
xy10214 小鼠黑色瘤细胞,B16细胞
xy10215 小鼠骨髓细胞,FDC-P1细胞
xy10216 小鼠骨髓瘤细胞,SP2/0细胞
xy10217 小鼠骨髓瘤细胞,Sp2/0-Ag14细胞
xy10218 小鼠骨髓瘤细胞,P3X63Ag8细胞
xy10219 小鼠骨髓瘤细胞,P3-X63-Ag8.653细胞
xy10220 小鼠骨髓瘤细胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]细胞
xy10221 小鼠骨髓瘤细胞,NS1细胞
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文献和实验有Ca2+、Mg2+,因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液。Earle平衡液含有较高的NaHCO3(2.2g/L),适合于5%CO2的培养条件,Hank"s平衡液仅含有0.35g/L NaHCO3,不能用于5%CO2的环境,若放入CO2培养相,溶液将迅速变酸,使用时应注意。 配制溶液应使用双蒸水或去离子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+,应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温灭菌。 二、消化液:取材进行原代培养时常常需要将组织块消
[试剂及配制] (1)聚蔗糖-泛影葡胺分层(D=1.085) (2)HEPES-ACM缓冲液:HEPES25mmol/L中含CaCl21mmol、NaCl130mmol、KCl5mmol、MgCl21mmol,用1mol/LNaOH调节至pH7.4。 (3)无Ca2+、Mg2+Hank’s液 [操作方法] (1)取肝素抗凝血3ml,与等体积的HEPES-ACM缓冲液混匀后,叠加在3ml密度为1.085的分层液上,2000r/min离心20min
一、自然沉降法 人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000~1000:1,两类细胞的沉降速度不同,据此加以分离。自然沉降法是利用红细胞自然沉降率较快加以分离。该法简便易行,对细胞损伤少,但纯度差。 [试剂及配制] (1)无Ca2+、Mg2+,Hank’s液 (2)含10%~20%灭活小牛血清Hank’s液 [操作方法] (1)取静脉血2ml,放入加有抗凝剂的试管中,轻轻混匀; (2)将试管直立静置于室温或37℃
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