DAB Tablet (DAB . 4HCl 5mg/Tab

免疫组织化学（HRP-DAB系统）

化物酶，然后用PBS洗涤三次，每次 5min。4 ） 加入一抗（用3%BSA-PBS封闭液1:50稀释一抗），37℃湿盒孵育1h。5 ） 加入Post-blocking室温湿盒孵育30min,然后用PBS洗涤三次，每次5min。6 ） 加入稀释好的辣根过氧化物酶（HRP）标二抗，室温下湿盒孵育30min。7 ） 用PBS洗涤玻片5次，每次5min。8 ） 按照DAB试剂盒说明添加显色液，避光显色30s-5min。用蒸馏水终止显色反应。9 ） 苏木精进行复染色3min,用蒸馏水冲洗。10

免疫组化实验DAB显色时间如何把握？

（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗； （2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间； （3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间； （4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现

过氧化物酶DAB法

化，形成有色多聚体沉淀，其中DAB被氧化为棕褐色沉淀，TMB被氧化为深蓝色沉淀。       DAB法：过氧化物酶与过氧化氢作用产生游离氧，后者使无色的供氢体DAB氧化为棕褐色沉淀定位于过氧化物酶所在部位。       1)孵育液配制     DAB                                          5mg     0．05mol/L Tris―HCl缓冲液(TNB，pH 7．6)     10ml     1％H2 0：